A. ACARA
Praktikum analisa kuantitatif vitamin C dengan metode iodimetri (secara langsung).
B. PRINSIP
Oksidasi analat oleh I2 sehingga I- tereduksi menjadi ion iodida.
C. TUJUAN
Mengetahui kadar vitamin C dalam sample yang dianalisa.
D. DASAR TEORI
Vitamin dikenal sebagai suatu kelompok senyawa organik yang tidak termasuk dalam golongan karbohidrat, protein, maupun lemak, dan terdapat dalam jumlah yang kecil dalam bahan makanan tetapi sangat penting peranannya bagi beberapa fungsi tertentu tubuh untuk menjaga kelangsungan hidup serta pertumbuhan. Vitamin tidak memberikan kalori dan tidak ikut menyusun jaringan tubuh tetapi memberikan fungsi yang spesifik dalam tubuh.
Vitamin tersebut umumnya dapat dikelompokan ke dalam 2 golongan utama yaitu vitamin yang larut dalam lemak yang meliputi A, D, E, K dan vitamin yang larut dalam air yang terdiri dari vitamin C dan B.
• Vitamin larut lemak
o Vitamin A
Vitamin A (retinol) terutama terdapat pada minyak ikan, hati, kuning telur, mentega dan krim. Sayuran berdaun hijau dan sayuran berwarna kuning mengandung karoten (misalnya beta karoten), yang secara perlahan akan diubah oleh tubuh menjadi vitamin A.
o Vitamin D
Vitamin D dapat disintesis dalam tubuh manusia dan hewan, diaktifkan oleh sinar matahari dan diangkut ke berbagai bagian tubuh untuk dimanfaatkan dan atau disimpan dalam hati.
o Vitamin E
Vitamin E (α-tokoferol) adalah suatu antioksidan yang melindungi sel-sel tubuh terhadap kerusakan oleh senyawa kimia reaktif yang dikenal sebagai radikal bebas.
o Vitamin K
Vitamin K adalah nama generik untuk beberapa bahan yang diperlukan dalam pembekuan darah yang normal.
• Vitamin larut air
o Vitamin B1 (Tiamin)
Vitamin B1 diperlukan dalam sejumlah reaksi yang melibatkan enzim, termasuk pelepasan energi dari gula. Sumber dari vitamin B1 adalah ragi, daging babi, tanaman polong, dan gandum.
o Vitamin B2 (riboflavin)
Vitamin B2 sangat penting dalam berbagai proses yang terjadi di dalam sel, terutama yang menghasilkan energi dan metabolisme asam amino, sumber makanan yang mengandung vitamin B2 adalah produk-produk olahan susu, daging, ikan, dan unggas.
o Vitamin B3 (Niasin)
Niasin penting untuk metabolisme berbagai bahan dalam tubuh, bersifat tahan panas, asam, alkali, oksidasi, vitamin ini banyak ditemukan dalam banyak bahan makanan.
o Vitamin B5 (Asam pantotenat atau Vilantae)
Vitamin ini merupakan blok pembangun koenzim A yang sangat diperlukan untuk metabolisme, banyak terdapat dalam tumbuhan hijau dan mikroorganisme kecuali hewan tingkat tinggi.
o Vitamin B6 (Piridoksin)
Vitamin ini diperlukan sebagai katalisator pada reaksi yang melibatkan asam amino dalam sel darah, sel otak, dan sel kulit. Vitamin ini stabil terhadap panas dan asam. Akan tetapi rusak dalam larutan alkali.
o Vitamin B7 (Biotin)
Adalah vitamin B yang diperlukan unutk metabolisme lemak dan karbohidrat, biotin banyak ditemukan dalam berbagai makanan dan sumber yang mengandung banyak biotin adalah hati, ginjal, pankreas, telur, susu, ikan, dan kacang-kacangan.
o Vitamin B9 (vitamin M atau vitamin N atau Asam folat atau folasin)
Fungsi asam folat (folasin) berkaitan dalam pembentukan salah satu komponen DNA yang penting (timidin), asam folat sedikit larut dalam air, mudah dioksidasi dalam larutan asam, peka terhadap sinar matahari.
o Vitamin B12 (Sinokobalalamin)
Vitamin B12 saling berkaitan dalam pembentukan sel darah merah dan dalam pembentukan salah satu komponen DNA yang penting (timidin), vitamin ini tahan terhadap panas, inaktif oleh cahaya, asam keras, dan larutan alkali.
o Vitamin C
Vitamin C banyak membantu dalam proses metabolisme energi, vitamin ini tidak disimpan dalam tubuh, tetapi dikeluarkan dalam tubuh melalui urin dalam jumlah kecil. Karena itulah, vitamin perlu dikonsumsi setiap hari umtuk mencegah kekurangan yang dapat mengganggu fungsi tubuh normal.
Vitamin yang larut dalam lemak banyak terdapat dalam daging ikan, minyak ikan dan biji-bijian sumber minyak seperti kacang tanah, kacang kedelai, dan sebagainya. Dan vitamin yang larut dalam air bergerak bebas dalam tubuh, darah, limpa. Karena sifatnya yang larut dalam air, vitamin mudah rusak dalam pengolahan dan mudah hilang karena tercuci atau terlarut oleh air sehingga keluar dari bahan.
Vitamin mempunyai sifat fisis maupun kimiawi yang spesifik, maka cara analisanya juga spesifik. Ada beberapa cara analisa vitamin yaitu cara kimiawi, cara biologis maupun cara mikrobiologis.
E. ALAT DAN BAHAN
• Alat
o Spatula
o Beaker glass 250 mL
o Neraca analitik
o Labu ukur 100 mL
o Corong gelas
o Batang pengaduk
o Pipet tetes
o Botol semprot
o Pipet ukur 10 mL
o Erlenmeyer 250 mL
o Gelas ukur 25 mL
o Buret coklat 25 mL
• Bahan
o Sampel (ale-ale)
o Aquadest
o Amilum 1%
o Larutan I2 0,01 N
F. PROSEDUR
• Menimbang 10 g sampel
• Memasukkan ke dalam labu ukur dan mengencerkannya dengan aquadest sampai tanda batas.
• Memipet 10 mL filtrat kemudian memasukkannya ke dalam Erlenmeyer 250 mL.
• Menambahkan 2 mL larutan amilum 1% dan bila perlu menambahkan 20 mL aquadest.
• Menitrasi dengan larutan I2 0,01 N sampai larutan berwarna biru.
G. DATA PENGAMATAN
• Standardisasi larutan Na2S2O3 dengan KIO3
No g KIO3 mL Na2S2O3 N Na2S2O3
1 0,1008 28,8 0,0981
Perhitungan :
• Konsentrasi Na2S2O3
=
=
=
= 0,0981 N Na2S2O3
• Standardisasi larutan I2
V1N1 = V2N2
2,5 x 0,0981 = 25 x N2
N = 0,0098 N
• mL iod 0,01 N = 0,86 mg Vitamin C
mg asam askorbat =
= 0,98 x 0,88
= 0,8624 mg
• Titrasi vitamin C (volume 100 mL)
No g Sampel mL I2 N I2 Fp % vit. C
1 10,0327 0,15 0,0098 10 12,9%
2 10,0327 0,1 0,0098 10 8,6%
• Titrasi 1
% Vitamin C =
= 12,9 %
• Titrasi 2
% Vitamin C =
= 8,6%
• Titrasi vitamin C (volume 50 mL)
No g Sampel mL I2 N I2 Fp % vit. C
1 10,1243 0,2 0,0098 5 0,52
2 10,1243 0,2 0,0098 5 0,52
• Titrasi 1
% Vitamin C =
= 0,52 %
H. PEMBAHASAN
Praktikum analisa kuantitatif vitamin C dalam sample dilakukan dengan menggunakan metode titrasi iodimetri (titrasi langsung) Penentuan ini dilakukan dengan menggunakan larutan I2 0,01 N yang telah distandardisasi sebagai titrant.
Sample yang dipergunakan saat praktikum adalah minuman kemasan yang banyak dijual di pasaran dengan merk dagang Ale-ale. Dalam kemasan minuman disebutkan bahwa dalam minuman tersebut mengandung vitamin C.
Vitamin C atau asam askorabat mempunyai berat molekul 178 dengan rumus molekul C6H8O6. Dalam bentuk Kristal tidak berwarna, Vitamin C memiliki titik cair 190-192oC, bersifat larut dalam air dan sedikit larut dalam aseton atau alkohol yang mempunyai berat molekul rendah. Akan tetapi vitamin C sukar larut dalam pelarut organic yang pada umumnya dapat melarutkan lemak.
Hal yang pertama kali dilakukan dalam analisa kuantitatif vitamin C adalah standardisasi larutan I2 0,01 N proses ini dilakukan dengan menggunakan larutan Natrium Tiosulfat (Na2S2O3), larutan natrium tiosulfat juga sebelumnya telah distandardisasi dengan menggunakan KIO3 sebagai baku primer. Berdasarkan hasil praktikum dan perhitungan diketahui bahwa konsentrasi larutan I2 adalah 0,0098 N.
Titrasi iodimetri dilakukan dengan menggunakan amilum sebagai indikator. Seperti yang sudah diketahui bahwa prinsip dari titrasi iodimetri adalah reduksi analat oleh I2 menjadi I-.
penentuan kadar vitamin C dengan metode titarsi iodimetri ini didasarkan pada prinsip tereduksinya analat oleh I2 menjadi ion I-.
ARed + I2 Aoks + I-
Iod merupakan oksidator yang tidak terlalu kuat, sehingga hanya zat-zat yang merupakan reduktor yang cukup kuat yang dapat dititrasi. Sehingga penerapannya tidak terlalu luas, salah satu penerapan titrasi dengan metode iodimetri adalah pada penentuan bilangan iod minyak dan lemak juga vitamin C.
Proses pengujian untuk sample ale-ale dilakukan dengan 2 kali pengenceran yaitu 100 mL dan 50 mL, dan masing-masing pengenceran dilakukan 2 kali pengujian (duplo) sehingga saat praktikum dilakukan 4 kali titrasi, masing-masing 2 untuk setiap pengenceran.
Hal tersebut dilakukan karena pada pengujian pertama dengan pengenceran 100 mL volume I2 yang diperlukan sangat kecil, sehingga diperkirakan dengan jumlah pengenceran yang tidak terlalu banyak, maka volume titrasi juga akan sedilit bertambah.
Untuk sample dengan pengenceran 100 mL berat sample yang berhasil ditimbang adalah 10,0327 g, sample ditimbang langsung dalam labu ukur dan diencerkan dengan menggunakan aquadest sampai tanda batas.
Setelah sample ditimbang, selanjutnya sample dipipet sebanyak 10 mL dan dimasukan dalam erlenmeyer, kemudian ditmabahkan amilum 1% sebagai indikator, dan 20 mL aquadest, setelah itu dititrasi dengan menggunakan I2 0,01 N.
Proses titrasi dilakukan sampai larutan dalam erlenmeyer berubah warna menjadi biru, warna biru yang dihasilkan merupakan iod-amilum yang menandakan bahwa proses titrasi telah mencapai titik akhir, indikator yang dipergunakan dalam analisa vitamin C dengan metode iodimetri adalah larutan amilum. Berdasarkan hasil praktikum dan perhitungan kadar vitamin C pada pengenceran 100 mL adalah 8,6% dan 12,9%. Hasil tersebut tidak dapat dirata-ratakan karena selisih dari kedua nilai tersebut cukup jauh.
Sedangkan pada proses titrasi pada pengenceran 50 mL, juga dilakukan 2 kali (duplo) dan titik akhir juga ditandai dengan warna biru, berdasarkan hasil praktikum dan perhitungan maka dapat diketahui bahwa kadar vitamin C dalam sample pada pengenceran 50 mL adalah 8,52%.
Proses titrasi pada pengenceran 50 mL hasilnya sangat presisi dan akurasi, hal ini dikarenakan volume titrant pada percobaan pertama dan yang kedua sama-sama menghabiskan titrant sebanyak 2 mL.
Dari hasil tersebut, maka dapat disimpulkan bahwa hasil titrasi dari pengenceran 100 mL yaitu 8,6% dan dari pengenceran 50 mL yaitu 8,52%, sehingga dapat disimpulkan bahwa hasil perhitungan kadar vitamin C 12,9% terjadi kesalahan, hal tersebut dapat disebabkan karena terlewatnya titik akhir sehingga volume titrasi meningkat, dapat pula disebabkan karena iod merupakan oksidator lemah sehingga tidak dapat bereaksi terlalu sempurna.
Untuk menghindari hal tersebut, maka sering dibuat kondisi yang menggeser kesetimbangan ke arah hasil reaksi antara lain dengan mengatur pH dan menambahkan bahan pengkompleksan. Akan tetapi hal tersebut tidak dilakukan saat praktikum.
I. KESIMPULAN
Pengujian kadar vitamin C dalam sample dilakukan dengan menggunakan metode iodimetri, yaitu oksidasi analat oleh I2 sehingga I- tereduksi menjadi ion iodida. Pengujian dilakukan 2 kali dengan volume pengenceran 100 dan 50 mL, dan masing-masing pengenceran dilakukan 2 kali pengujian (duplo).
Berdasarkan praktikum dan hasil perhitungan, maka dapat diketahui bahwa pada pengenceran 100 mL kadar dari vitamin C dalam sample adalah 8,6% dan 12,9%. Sedangkan pada pengenceran 50 mL adalah 8,52%.
Dan untuk hasil akhir, nilai kadar vitamin C dalam minuman kemasan adalah pada pengenceran 100 mL yaitu 8,6% dan pada pengenceran 50 mL yaitu 8,52%, hal ini dikarenakan selisih dari ke 2 nilai tersebut tidak terlalu besar.
J. DAFTAR PUSTAKA
• Sudarmadji, Slamet. et al. 1996. Prosedur Analisis Bahan Makanan dan Pertanian.Yogyakarta: Penerbit Liberty.
• Sudarmadji, Slamet. et al. 1996. Analisis Bahan Makanan dan Pertanian.Yogyakarta: Penerbit Liberty.
• Winarno, F.G. 1997. Kimia Pangan dan Gizi. Jakarta: Gramedia.
Selasa, 02 Maret 2010
ANALISIS INSTRUMENTAL DENGAN SPEKTROFOTOMETRI UV/VIS
ANALISIS DENGAN METODE
SPEKTROFOTOMETRI UV/VIS
Perkembangan kimia analisis (kualitatif dan kuantitatif):
Analisis visual Analisis Instrumental
Analisis instrumental dikenal juga sebagai analisis Fisiko-kimia :
memakai instrumen
penentuan berdasarkan sifat-sifat fisiko-kimia dari molekul atau atom sampel yang dianalisis
ANALISIS KLASIK - ANALISIS MODERN
Analisis Instrumen berkembang pesat karena :
• Adanya tuntutan dan kebutuhan analisis terhadap matriks sampel yang sulit, jumlahnya sedikit, waktu analisis yang singkat, tidak diperlukan macam-macam pereaksi.
• Kesahihan analisis instrumental didukung oleh kecermatan, ketelitian, keterulangan, sensitivitas, kelurusan dan kestabilan dari suatu metode analisis yang dipakai.
• Sahih : memberikan hasil dengan kecermatan dan ketelitian yang memadai.
• Cermat (presisi): kedekatan hasil yang diperoleh dengan nilai sebenarnya, dinyatakan dengan % perolehan kembali (recovery).
• Ketelitian (akurasi):simpangan baku dari beberapa kali penentuan kuantitatif thd sampel yang dianalisis dengan metode yang sama.
• Keterulangan : pengulangan thd sampel yang sama dan metode yang sama dengan hasil analisis memenuhi persyaratan statistik.
• Sensitivitas : batas kadar terkecil yang dapat ditentukan, LOD (low of detection).
• Kestabilan : mempunyai ketahanan thd pengujian dg merk instrumen berbeda, waktu dan tempat berbeda.
Akurasi dan Presisi
Presisi ,Akurasi Presisi, tidak Akurasi
Tidak Presisi, Akurasi Tidak Presisi, tidak Akurasi
Kekurangan :
• Harga alat relatif mahal
• Perawatan rumit
• Pengoperasian sulit (perlu tenaga ahli)
• Kondisi ruangan : suhu, kelembaban
• Memerlukan alat-alat pendukung
• Harga analisa mahal
TEKNIK SPEKTROSKOPI
• Salah satu teknik analisis fisiko-kimia yang mengamati interaksi atom/molekul dengan radiasi elektromagnetik (REM) (interaksi sinar dengan materi)
• Warna-warna yang nampak adalah akibat serapan energi oleh senyawa organik maupun anorganik. Energi cahaya pada panjang gelombang tertentu yang diserap oleh suatu senyawa tergantung pada struktur senyawa tersebut. Oleh karena itu, teknik-teknik spektroskopi dapat digunakan untuk menentukan struktur senyawa yang tidak diketahui (Analisis Kualitatif)
REM
• Radiasi Elektromagnetik adalah energi yang dipancarkan menembus ruang dalam bentuk gelombang-gelombang. Setiap jenis radiasi elektromagnetik (gelombang radio, ultraviolet, inframerah, tampak, dll) dicirikan oleh panjang gelombang (wavelength, λ) dan frekuensinya (v).
• Radiasi elektromagnetik dipancarkan dalam bentuk paket-paket energi yang disebut foton atau kuantum. Energi suatu foton berbanding terbalik dengan panjang gelombangnya.
• Radiasi dengan λ lebih pendek mempunyai E yang lebih tinggi. Oleh karena itu, sebuah foton cahaya UV berenergi lebih tinggi dari pada foton cahaya tampak dan jauh lebih tinggi dari pada sebuah foton gelombang radio. Sebaliknya, energi sebuah foton berbanding lurus dengan frekuensinya. Hubungan tersebut dirumuskan dalam persamaan :
Prinsip pengukuran
• Jika radiasi elektromegnetik dilewatkan pada suatu media yang homogen, maka sebagian radiasi itu ada yang dipantulkan, diabsorpsi dan ada yang ditransmisikan.
• Radiasi yang dipantulkan dapat diabaikan, sedangkan radiasi yang dilewatkan sebagian diabsorpsi dan sebagian lagi ditransmisikan.
• Akibat interaksi tsb akan menyebabkan : hamburan (scattering), absorpsi (absorption), dan emisi (emision) REM oleh atom/molekul yang diamati.
1. Hamburan : Spektrofotometri Raman
2. Absorpsi : Spektrofotometri uv-vis dan IR
3. Absorpsi yang disertai emisi : fosforesensi dan fluoresensi
• Masing-masing memberikan kegunaan dan keunggulan yang berbeda-beda dalam bidang analisis instrumental
Perumusan
• Io = Ia + It + Ir
• Io = Ia + It (Ir diabaikan krn ada blanko)
• Angka banding It/Io adalah bagian dari cahaya masuk yang diteruskan oleh medium setebal l dan disebut Transmitan.
• Kebalikannya (Io/It) adalah opasitas (keburaman), maka Absorbans, A, adalah :
A = log Io/It
• Hukum Lambert-Beer : mengkaji efek konsentrasi penyusun larutan yang berwarna terhadap transmisi dan absorpsi cahaya.
“Intensitas cahaya monokromatik berkurang secara eksponensial dengan bertambahnya konsentrasi zat penyerap secara linier”
A = a. b. C
a = Absorpsivitas (besarnya serapan)
b = tebal medium
C = konsentrasi larutan
SPEKTROFOTOMETRI UV-VIS
• Pengukuran serapan cahaya oleh suatu senyawa di daerah :
- ultraviolet (200 – 350 nm)
- sinar tampak (350 – 780 nm)
• Penyerapan cahaya uv atau tampak akan menyebabkan terjadinya transisi elektronik, yaitu promosi elektron-elektron dari orbital keadaan dasar (energi rendah) ke orbital keadaan tereksitasi (energi lebih tinggi).
Transisi Elektronik
E = hv = hc/ l
Molekul yang memerlukan E> akan menyerap pada l pendek.
Absorpsi pd 100 nm(uv) 750 nm(tampak)
Jenis Transisi Elektron
Keadaan dasar suatu molekul mengandung elektron-elektron valensi dalam tiga jenis utama orbital molekul, yaitu:
1. Orbital sigma(σ)
2. Orbital phi (π)
3. Orbital non bonding (n)
CH3
π .. C O: n
σ
CH3 formaldehide
σ* Anti bonding
π * Anti bonding
n
Nonbonding
E π Bonding
σ Bonding
Diagram tingkat energi elektronik
• Eksitasi elektron (σ – σ*)
E> , uv jauh l 100 – 200 nm, terjadi pada ikatan tunggal (alkana).
• Eksitasi elektron (π – π*)
uv jauh l 100 – 200 nm, terjadi pada C=C dan C≡C(alkena dan alkuna),
• Eksitasi elektron (n – σ*)
uv dekat dan sinar tampak (l 200 – 380 nm) terjadi pada gugus karbonil (dimetil keton dan asetaldehide)
Absorpsi pada sinar tampak
• Terjadi bila terdapat sejumlah gugus kromofor yang terkonjugasi (-C=C-C=C-). Pada sistem tersebut elektronnya mempunyai mobilitas yang tinggi. Oleh karena itu energi yang dibutuhkan untuk mengeksitasi elektronnya tidak terlampau tinggi. Semakin panjang rantai terkonjugasinya semakin rendah eksitasinya. Dan jika radiasi yang diabsorpsi setara dengan energi radiasi sinar tampak maka senyawa yang mengabsorpsi tersebut tampak berwarna.
Serapan sinar dan zat warna
Materi (sinar yang diserap: mrp warna komplemen)
REM
Mata (sinar yang diteruskan)
Warna komplementer
l nm Warna (diteruskan) Warna komplementer
400 – 435 Ungu Hijau kekuningan
435 – 480 Biru Kuning
480 – 490 Biru-kehijauan Jingga
490 – 500 Hijau kebiruan Merah
500 – 560 Hijau Ungu kemerahan
560 – 580 Hijau kekuningan Ungu
580 – 595 Kuning Biru
595 – 610 Jingga Biru kehijauan
610 – 750 Merah Hijau kebiruan
SUMBER RADIASI
Fungsi :
1. Memberikan energi radiasi pada l yang tepat untuk pengukuran
2. Mempertahankan intensitas sinar yang tetap selama pengukuran
Sumber radiasi :
• VISIBEL : Wolfram/Tungstein
l 350 – 780 nm
• UV : Deuterium
l 180 – 350 nm
MONOKROMATOR
• Fungsi : untuk memperoleh radiasi monokromatis dari sumber radiasi polikromatis.
• Monokromator terdiri dari susunan : celah masuk – filter – kisi (grating difraksi) atau prisma – celah keluar.
Susunan monokromator
1. Celah masuk (slit)
• Celah monokromator adalah bagian dari suatu sistem optik monokromator pada spektrofotometer uv-vis.
Fungsi : mempersempit radiasi masuk dari sumber radiasi ke zat
• Pengaturan celah (slit) berpengaruh terhadap terbentuknya radiasi monokromatis dan resolusi panjang gelombang
2. Filter : mengubah sinar menjadi sinar sejajar
3. Kisi difraksi atau prisma
Kisi difraksi : pemantulan sinar (menghasilkan dispersi yang sama untuk semua l). Prisma : pembiasan (terpecahnya radiasi menjadi beberapa radiasi dg l tertentu)
4. Celah keluar: mengisolasi sinar, menghalangi sinar lain dna membiarkan sinar yang diinginkan melewati zat.
Pemilihan l
l maks: panjang gelombang dimana terjadi eksitasi elektronik yang memberikan absorbansi maksimum.
• Pada l maks : kepekaan maksimum, signal kuat pada larutan dengan konsentrasi tertentu.
• Perbedaan absorban sangat minimal dengan berubahnya panjang gelombang disekitar panjang gelombang absorban maksimum sehingga kesalahan pengukuran sangat kecil.
KUVET
• Sampel pada pengukuran ini umumnya berbentuk larutan
• Bahan kuvet harus transparan :
Kaca : VIS (380 – 1100 nm)
silika : UV-VIS (190 – 1100 nm)
• Posisi kuvet harus tegak lurus terhadap sinar datang
• Kuvet untuk blanko dan kuvet untuk sampel harus matched
DETEKTOR
• Fungsi : mengukur radiasi yang ditransmisikan oleh sampel dan mengukur intensitas radiasi tersebut.
• Syarat :
1. Mempunyai kepekaan yang tinggi terhadap radiasi yang diterima.
2. Mempunyai kemampuan memberikan respons terhadap radiasi pada daerah panjang gelombang yang lebar (uv-vis).
3. Memberikan respons terhadap radiasi dalam waktu yang serempak.
4. Signal elektronik yang diteruskan oleh detektor harus dapat diamplifikasi oleh penguat (amplifier) ke recorder (pencatat).
REKORDER
• Signal listrik yang keluar dari detektor diterima pada sirkuit potensiometer yang dapat langsung mengukur transmitans atau absorban. Rekorder dapat menggambarkan secara otomatis kurva absorpsi pada kertas rekorder.
APLIKASI SPEKTROFOTOMETER UV-VIS
• Analisis Kualitatif : dipakai untuk data sekunder atau data pendukung.
1. Pemeriksaan kemurnian : dibandingkan dengan standar.
2. Identifikasi : pengukuran l maks dan absorpsivitas molar.
3. Elusidasi struktur : informasi adanya gugus kromofor dan gugus fungsi melalui profil spektrum
• Analisis Kuantitatif
1. Senyawa Tunggal : Dengan membandingkan absorban senyawa yang dianalisis dengan reference standard pada panjang gelombang maksimum.
2. Senyawa multikomponen : mengukur absorban campuran pada panjang gelombang maksimum masing-masing
A l1 = a1(l1). C1 + a2(l1). C2
A l2= a1(l2). C1 + a2(l2). C2
Penentuan kafein dalam Teh
• Preparasi Sampel
1. Timbang teliti 0.5 – 1.5 g sampel teh yang telah dihaluskan, tambahkan 5 g MgO masukkan ke dalam beaker glass, tambahkan 100 ml aquadest
2. Didihkan larutan selama 30 menit, kemudian dinginkan.
3. Larutan disaring 2x dengan kertas saring biasa dan dengan saringan membran 0.5 µm
4. Masukkan larutan ke dalam labu ukur 250 ml, tepatkan dengan aquadest sampai tanda batas.
5. Lakukan pengenceran sebanyak 10 kali dari larutan 4.
• Pereaksi
a. Larutan induk kafein (50 ppm)
Pipet 10 ml larutan induk kafein 500 ppm ke dalam labu ukur 100 ml , encerkan dengan aquadest sampai tanda batas.
b. Larutan baku kafein
Buat kurva kalibrasi dari larutan A dengan dengan cara memipet larutan A masing-masing 4 ml; 6ml; 8ml; 10ml dan 12 ml, larutan ini mengandung kafein 4; 6 ; 8 ; 10;12 ppm.
c. Ukur larutan baku dan sampel pada l 273 nm.
d. Hitung kadar kafein dalam sampel.
SPEKTROFOTOMETRI UV/VIS
Perkembangan kimia analisis (kualitatif dan kuantitatif):
Analisis visual Analisis Instrumental
Analisis instrumental dikenal juga sebagai analisis Fisiko-kimia :
memakai instrumen
penentuan berdasarkan sifat-sifat fisiko-kimia dari molekul atau atom sampel yang dianalisis
ANALISIS KLASIK - ANALISIS MODERN
Analisis Instrumen berkembang pesat karena :
• Adanya tuntutan dan kebutuhan analisis terhadap matriks sampel yang sulit, jumlahnya sedikit, waktu analisis yang singkat, tidak diperlukan macam-macam pereaksi.
• Kesahihan analisis instrumental didukung oleh kecermatan, ketelitian, keterulangan, sensitivitas, kelurusan dan kestabilan dari suatu metode analisis yang dipakai.
• Sahih : memberikan hasil dengan kecermatan dan ketelitian yang memadai.
• Cermat (presisi): kedekatan hasil yang diperoleh dengan nilai sebenarnya, dinyatakan dengan % perolehan kembali (recovery).
• Ketelitian (akurasi):simpangan baku dari beberapa kali penentuan kuantitatif thd sampel yang dianalisis dengan metode yang sama.
• Keterulangan : pengulangan thd sampel yang sama dan metode yang sama dengan hasil analisis memenuhi persyaratan statistik.
• Sensitivitas : batas kadar terkecil yang dapat ditentukan, LOD (low of detection).
• Kestabilan : mempunyai ketahanan thd pengujian dg merk instrumen berbeda, waktu dan tempat berbeda.
Akurasi dan Presisi
Presisi ,Akurasi Presisi, tidak Akurasi
Tidak Presisi, Akurasi Tidak Presisi, tidak Akurasi
Kekurangan :
• Harga alat relatif mahal
• Perawatan rumit
• Pengoperasian sulit (perlu tenaga ahli)
• Kondisi ruangan : suhu, kelembaban
• Memerlukan alat-alat pendukung
• Harga analisa mahal
TEKNIK SPEKTROSKOPI
• Salah satu teknik analisis fisiko-kimia yang mengamati interaksi atom/molekul dengan radiasi elektromagnetik (REM) (interaksi sinar dengan materi)
• Warna-warna yang nampak adalah akibat serapan energi oleh senyawa organik maupun anorganik. Energi cahaya pada panjang gelombang tertentu yang diserap oleh suatu senyawa tergantung pada struktur senyawa tersebut. Oleh karena itu, teknik-teknik spektroskopi dapat digunakan untuk menentukan struktur senyawa yang tidak diketahui (Analisis Kualitatif)
REM
• Radiasi Elektromagnetik adalah energi yang dipancarkan menembus ruang dalam bentuk gelombang-gelombang. Setiap jenis radiasi elektromagnetik (gelombang radio, ultraviolet, inframerah, tampak, dll) dicirikan oleh panjang gelombang (wavelength, λ) dan frekuensinya (v).
• Radiasi elektromagnetik dipancarkan dalam bentuk paket-paket energi yang disebut foton atau kuantum. Energi suatu foton berbanding terbalik dengan panjang gelombangnya.
• Radiasi dengan λ lebih pendek mempunyai E yang lebih tinggi. Oleh karena itu, sebuah foton cahaya UV berenergi lebih tinggi dari pada foton cahaya tampak dan jauh lebih tinggi dari pada sebuah foton gelombang radio. Sebaliknya, energi sebuah foton berbanding lurus dengan frekuensinya. Hubungan tersebut dirumuskan dalam persamaan :
Prinsip pengukuran
• Jika radiasi elektromegnetik dilewatkan pada suatu media yang homogen, maka sebagian radiasi itu ada yang dipantulkan, diabsorpsi dan ada yang ditransmisikan.
• Radiasi yang dipantulkan dapat diabaikan, sedangkan radiasi yang dilewatkan sebagian diabsorpsi dan sebagian lagi ditransmisikan.
• Akibat interaksi tsb akan menyebabkan : hamburan (scattering), absorpsi (absorption), dan emisi (emision) REM oleh atom/molekul yang diamati.
1. Hamburan : Spektrofotometri Raman
2. Absorpsi : Spektrofotometri uv-vis dan IR
3. Absorpsi yang disertai emisi : fosforesensi dan fluoresensi
• Masing-masing memberikan kegunaan dan keunggulan yang berbeda-beda dalam bidang analisis instrumental
Perumusan
• Io = Ia + It + Ir
• Io = Ia + It (Ir diabaikan krn ada blanko)
• Angka banding It/Io adalah bagian dari cahaya masuk yang diteruskan oleh medium setebal l dan disebut Transmitan.
• Kebalikannya (Io/It) adalah opasitas (keburaman), maka Absorbans, A, adalah :
A = log Io/It
• Hukum Lambert-Beer : mengkaji efek konsentrasi penyusun larutan yang berwarna terhadap transmisi dan absorpsi cahaya.
“Intensitas cahaya monokromatik berkurang secara eksponensial dengan bertambahnya konsentrasi zat penyerap secara linier”
A = a. b. C
a = Absorpsivitas (besarnya serapan)
b = tebal medium
C = konsentrasi larutan
SPEKTROFOTOMETRI UV-VIS
• Pengukuran serapan cahaya oleh suatu senyawa di daerah :
- ultraviolet (200 – 350 nm)
- sinar tampak (350 – 780 nm)
• Penyerapan cahaya uv atau tampak akan menyebabkan terjadinya transisi elektronik, yaitu promosi elektron-elektron dari orbital keadaan dasar (energi rendah) ke orbital keadaan tereksitasi (energi lebih tinggi).
Transisi Elektronik
E = hv = hc/ l
Molekul yang memerlukan E> akan menyerap pada l pendek.
Absorpsi pd 100 nm(uv) 750 nm(tampak)
Jenis Transisi Elektron
Keadaan dasar suatu molekul mengandung elektron-elektron valensi dalam tiga jenis utama orbital molekul, yaitu:
1. Orbital sigma(σ)
2. Orbital phi (π)
3. Orbital non bonding (n)
CH3
π .. C O: n
σ
CH3 formaldehide
σ* Anti bonding
π * Anti bonding
n
Nonbonding
E π Bonding
σ Bonding
Diagram tingkat energi elektronik
• Eksitasi elektron (σ – σ*)
E> , uv jauh l 100 – 200 nm, terjadi pada ikatan tunggal (alkana).
• Eksitasi elektron (π – π*)
uv jauh l 100 – 200 nm, terjadi pada C=C dan C≡C(alkena dan alkuna),
• Eksitasi elektron (n – σ*)
uv dekat dan sinar tampak (l 200 – 380 nm) terjadi pada gugus karbonil (dimetil keton dan asetaldehide)
Absorpsi pada sinar tampak
• Terjadi bila terdapat sejumlah gugus kromofor yang terkonjugasi (-C=C-C=C-). Pada sistem tersebut elektronnya mempunyai mobilitas yang tinggi. Oleh karena itu energi yang dibutuhkan untuk mengeksitasi elektronnya tidak terlampau tinggi. Semakin panjang rantai terkonjugasinya semakin rendah eksitasinya. Dan jika radiasi yang diabsorpsi setara dengan energi radiasi sinar tampak maka senyawa yang mengabsorpsi tersebut tampak berwarna.
Serapan sinar dan zat warna
Materi (sinar yang diserap: mrp warna komplemen)
REM
Mata (sinar yang diteruskan)
Warna komplementer
l nm Warna (diteruskan) Warna komplementer
400 – 435 Ungu Hijau kekuningan
435 – 480 Biru Kuning
480 – 490 Biru-kehijauan Jingga
490 – 500 Hijau kebiruan Merah
500 – 560 Hijau Ungu kemerahan
560 – 580 Hijau kekuningan Ungu
580 – 595 Kuning Biru
595 – 610 Jingga Biru kehijauan
610 – 750 Merah Hijau kebiruan
SUMBER RADIASI
Fungsi :
1. Memberikan energi radiasi pada l yang tepat untuk pengukuran
2. Mempertahankan intensitas sinar yang tetap selama pengukuran
Sumber radiasi :
• VISIBEL : Wolfram/Tungstein
l 350 – 780 nm
• UV : Deuterium
l 180 – 350 nm
MONOKROMATOR
• Fungsi : untuk memperoleh radiasi monokromatis dari sumber radiasi polikromatis.
• Monokromator terdiri dari susunan : celah masuk – filter – kisi (grating difraksi) atau prisma – celah keluar.
Susunan monokromator
1. Celah masuk (slit)
• Celah monokromator adalah bagian dari suatu sistem optik monokromator pada spektrofotometer uv-vis.
Fungsi : mempersempit radiasi masuk dari sumber radiasi ke zat
• Pengaturan celah (slit) berpengaruh terhadap terbentuknya radiasi monokromatis dan resolusi panjang gelombang
2. Filter : mengubah sinar menjadi sinar sejajar
3. Kisi difraksi atau prisma
Kisi difraksi : pemantulan sinar (menghasilkan dispersi yang sama untuk semua l). Prisma : pembiasan (terpecahnya radiasi menjadi beberapa radiasi dg l tertentu)
4. Celah keluar: mengisolasi sinar, menghalangi sinar lain dna membiarkan sinar yang diinginkan melewati zat.
Pemilihan l
l maks: panjang gelombang dimana terjadi eksitasi elektronik yang memberikan absorbansi maksimum.
• Pada l maks : kepekaan maksimum, signal kuat pada larutan dengan konsentrasi tertentu.
• Perbedaan absorban sangat minimal dengan berubahnya panjang gelombang disekitar panjang gelombang absorban maksimum sehingga kesalahan pengukuran sangat kecil.
KUVET
• Sampel pada pengukuran ini umumnya berbentuk larutan
• Bahan kuvet harus transparan :
Kaca : VIS (380 – 1100 nm)
silika : UV-VIS (190 – 1100 nm)
• Posisi kuvet harus tegak lurus terhadap sinar datang
• Kuvet untuk blanko dan kuvet untuk sampel harus matched
DETEKTOR
• Fungsi : mengukur radiasi yang ditransmisikan oleh sampel dan mengukur intensitas radiasi tersebut.
• Syarat :
1. Mempunyai kepekaan yang tinggi terhadap radiasi yang diterima.
2. Mempunyai kemampuan memberikan respons terhadap radiasi pada daerah panjang gelombang yang lebar (uv-vis).
3. Memberikan respons terhadap radiasi dalam waktu yang serempak.
4. Signal elektronik yang diteruskan oleh detektor harus dapat diamplifikasi oleh penguat (amplifier) ke recorder (pencatat).
REKORDER
• Signal listrik yang keluar dari detektor diterima pada sirkuit potensiometer yang dapat langsung mengukur transmitans atau absorban. Rekorder dapat menggambarkan secara otomatis kurva absorpsi pada kertas rekorder.
APLIKASI SPEKTROFOTOMETER UV-VIS
• Analisis Kualitatif : dipakai untuk data sekunder atau data pendukung.
1. Pemeriksaan kemurnian : dibandingkan dengan standar.
2. Identifikasi : pengukuran l maks dan absorpsivitas molar.
3. Elusidasi struktur : informasi adanya gugus kromofor dan gugus fungsi melalui profil spektrum
• Analisis Kuantitatif
1. Senyawa Tunggal : Dengan membandingkan absorban senyawa yang dianalisis dengan reference standard pada panjang gelombang maksimum.
2. Senyawa multikomponen : mengukur absorban campuran pada panjang gelombang maksimum masing-masing
A l1 = a1(l1). C1 + a2(l1). C2
A l2= a1(l2). C1 + a2(l2). C2
Penentuan kafein dalam Teh
• Preparasi Sampel
1. Timbang teliti 0.5 – 1.5 g sampel teh yang telah dihaluskan, tambahkan 5 g MgO masukkan ke dalam beaker glass, tambahkan 100 ml aquadest
2. Didihkan larutan selama 30 menit, kemudian dinginkan.
3. Larutan disaring 2x dengan kertas saring biasa dan dengan saringan membran 0.5 µm
4. Masukkan larutan ke dalam labu ukur 250 ml, tepatkan dengan aquadest sampai tanda batas.
5. Lakukan pengenceran sebanyak 10 kali dari larutan 4.
• Pereaksi
a. Larutan induk kafein (50 ppm)
Pipet 10 ml larutan induk kafein 500 ppm ke dalam labu ukur 100 ml , encerkan dengan aquadest sampai tanda batas.
b. Larutan baku kafein
Buat kurva kalibrasi dari larutan A dengan dengan cara memipet larutan A masing-masing 4 ml; 6ml; 8ml; 10ml dan 12 ml, larutan ini mengandung kafein 4; 6 ; 8 ; 10;12 ppm.
c. Ukur larutan baku dan sampel pada l 273 nm.
d. Hitung kadar kafein dalam sampel.
PENCAMPURAN & PEMISAHAN
A. ACARA
Praktikum pencampuran dan pemisahan
B. PRINSIP
• Pencampuran : menyatukan dua bahan atau lebih, sehingga bahan mencampur atau terdispersi sempurna.
• Pemisahan : mengambil komponen dari suatu bahan campuran
C. TUJUAN
Mengetahui karekteristik bahan pada saat dicampurkan dan dipisahkan.
D. DASAR TEORI
• PENCAMPURAN (MIXING)
Pencampuran adalah penyebaran satu partikel lain untuk mendapatkan penyebaran partikel-partikel lain yang merata satu sama lain. Proses pencampuran ini umum dijumpai sebagai salah satu unit pengolahan hasil-hasil pertanian. Proses pencampuran merupakan salah satu proses yang paling sulit dimengerti dan sulit diperhitungkan daripada pengertian secara deskripsi.
Pencampuran digunakan untuk mempersiapkan kombinasi yang seragam dari 2 atau lebih bahan. Bahan yang dicampurkan dapat berbentuk cair, padat, atau gas. Kombinasi bahan-bahan tersebut antara lain 2 atau lebih bahan padat, cair, atau gas, 2 atau lebih bahan cair serta bahan cair dan padat.
Hasil pencampuran dapat merupakan campuran yang homogen seperti campuran bahan-bahan cair yang larut satu sama lain dan campuran yang heterogen seperti campuran bahan padat yang kering.
Proses pencampuran mengalami hambatan apabila partikel-partikel yang dicampurkan berukuran dan berbentuk sama, akan tetapi berbeda berat jenisnya. Partikel-partikel yang berat cenderung untuk tetap tinggal di dasar wadah selama proses pencampuran. Partikel yang berbentuk bulat dan berukuran kecil cenderung naik ke permukaan. Kecenderungan ini dapat dilawan dengan mengangkat bahan tersebut ke permukaan wadah atau ke tengah-tengah campuran.
Suatu proses pencampuran dianggap berhasil apabila memenuhi hal-hal berikut :
• Hasil campuran seragan
• Waktu proses pencampuran singkat
• Biaya proses pencampuran dan upah buruh rendah
Pencampuran yang sempurna apabila contoh-contoh yang ditarik dari campuran memberikan persentase kandungan masing-masing komponen sesuai yang dikehendaki dan untuk persentase contoh yang satu dengan yang lain sama, atau hampir sama, sehingga dapat dianggap persentase tersebut berlaku untuk semua campuran.
Mesin pencampur dapat dikelompokkan atas 3 kelas besar, yaitu :
• Pencampur kipas pada pencampuran bahan cair
Pada pencampur kipas, aliran bahan cair dipertahankan oleh kipas yang berputar. Kapasitas yang cukup diperoleh dengan mengatur volume aliran sehingga seluruhnya dapat tergerakkan pada suatu satuan waktu yang tertentu.
Pencampuran terjadi apabila aliran berkecepatan tinggi berhubungan dengan bahan cair yang tergerak lambat.
Pola aliran selama pencampuran, tergantung dari jenis kipas yang digunakan, jenis pencampur kipas ini antara lain : kipas pengaduk, turbin, dan baling-baling, pola aliran bahan cair pada proses pencampuran berbeda akibat adanya penahan pada wadah.
• Pencampur untuk bahan kental (pasta)
Pencampuran bahan-bahan yang sangat kental, sangat bervariasi antara satu pencampuran dengan pencampuran lainnya. Semua tipe alat pencampur bahan berbentuk pasta beroperasi dengan kerja yang langsung pada bahan yang berdekatan pada elemen pencampur. Pengaduk berhubungan langsung dengan seluruh bahan atau bahan harus kena (kontak) dengan pengaduk. Peralatan pencampur ini pada umumnya berat dan membutuhkan banyak tenaga.
Alat pencampur pasta yang umum dipergunakan adalah mesin peramas (Kneader Machine). Alat ini terdiri dari 2 lengan berbentuk khas yang berputar berlawanan arah. Gerakan lengan ini melipat dan mengiris bahan terdapat di dalam wadah. Lengan ini juga berputar dengan kecepatan yang berbeda.
• Pencampur partikel padat
Alat pencampur pasta dapat juga dipergunakan untuk mencampurkan partikel-partikel padat. Prinsip alat pencampur partikel ini adalah menggantikan atau memindahlan bagian-bagian yang berbeda satu sama lain sehingga proses pencampuran menjadi lebih sederhana.
Proses pencampuran lebih sederhana terutama apabila secara kasar perbandingan bahan yang akan dicampur seimbang. Proses pencampuran dianggap selesai apabila rata-rata hasil analisa contoh yang ditarik telah mempunyai perbandingan sesuai dengan yang diingini.
• PERISTIWA PINDAH MASA
Peristiwa pindah massa terjadi terutama pada pemisahan suatu bahan ke dalam komponen-komponennya. Campuran bahan dapat dipisahkan secara mekanis seperti filtrasi bahan padat dari campuran padat cair. Cara pemisahan yang lain ialah dengan peristiwa pindah massa yang diikuti oleh perubahan konsentrasi.
Peristiwa pindah massa ditandai oleh pindah massa suatu molekul komponen dari suatu fasa ke fasa yang lain. Pindah massa akan menyebabkan perubahan konsentrasi tinggi ke daerah dengan konsentrasi rendah.
Pada umumnya operasi pindah massa dikelompokan menurut cara pindah massa itu terjadi. Secara umum operasi pindah massa dapat dikelompokkan sebagai berikut :
Pindah massa antara 2 fasa yang tidak saling larut
1. fasa gas – gas : pemisahan komponen-komponennya dapat pula dilakukan walaupun sangat sukar, misalnya dengan cara adsorpsi menggunakan adsorbent tertentu. Komponen yang tidak diinginkan akan terserap pada adsorbent.
2. fasa gas – cair : pemisahan dapat dilakukan dengan mengembunkan uap secara destilasi atau dengan absobsi fasa gas.
3. fasa gas – padat : molekul-molekul fasa padat terdispersi di udara, kadang-kadang fasa padat membentuk fasa cair terlebih dahulu, sering kali fasa padat langsung membentuk fasa gas.
4. fasa cair – cair : pemisahan dilakukan dengan operasi ekstraksi, yaitu operasi dengan menggunakan bahan pelarut cair.
5. fasa cair – padat : pemisahan dilakukan dengan membuat larutan lewat jenuh misalnya dengan penguapan larutan atau penurunan suhu larutan.
6. fasa padat – padat : dipisahkan secara mekanis yaitu dengan menggunakan ayakan, pengendapan, atau meniupkan udara pada bahan.
Pindah massa melalui selaput membrane
Selaput membran adalah selaput tipis yang dapat memisahkan campuran yang saling larut. Dengan aliran hidrodinamik salah satu komponen bergerak melewati selaput dan komponen yang lain tak dapat lewat.
Pindah massa antara 2 fasa yang saling larut
2 fasa yang saling larut dipisahkan secara difusi. Molekul yang lebih berat akan cenderung untuk mengumpul pada bagian bawah alat.
Pindah massa Karena perbedaan tegangan permukaan
Operasi pembusaan dapat dilakukan untuk memisahkan sabun dari air.
Tekhnik pemisahan, di antaranya adalah tehknik destilasi, ekstraksi, kristalisasi, humidifikasi, adsorpsi dan desorpsi.
E. ALAT DAN BAHAN
• Alat
Centrifuse Machine (manual)
Beaker glass 250 mL
Batang pengaduk
Gelas ukur 100 mL
Tabung reaksi plastik bertutup
• Bahan
Minyak goreng
Air
Telur
F. PROSEDUR
Membuat campuran
1. air + minyak ( 1 : 3 )
2. air + minyak + telur ( 3 : 1 : ½ )
mengaduk masing-masing campuran, dengan menggunakan batang pengaduk sampai homogen.
Mendiamkan campuran selama 15 s/d 20 menit.
Mengamati campuran 1 dan 2.
Memasukan campuran 2 ke dalam tabung reaksi plastik bertutup
Memutarnya campuran dalam tabung menggunakan centrifuse, selama 3 menit.
Mengamati campuran dalam tabung setelah dikelurkan dari centrifuse.
G. DATA PENGAMATAN
Tabel I, pencampuran dengan pengadukan manual
JENIS CAMPURAN KONDISI / KENAMPAKAN KETERANGAN
Air + Minyak terdapat 2 lapisan, minyak berada di atas berwarna kuning keruh, air berada di bawah berwarna putih kekeruhan. Tidak dapat bercampur, langsung terpisah setelah 15 detik
Air + Minyak + telur Terdapat 2 lapisan agak samara, minyak berada di atas, berwarna kuning seperti telur, air berada di bawah berwarna kuning seperti telur Tidak dapat bercampur, pada 43 detik, mulai terlihat pemisahan
Tabel II, pemisahan dengan centrifuse manual
JENIS CAMPURAN KONDISI / KENAMPAKAN KETERANGAN
Air + Minyak + telur Terdapat 2 lapisan yang memisah dengan sangat jelas, minyak berada di atas berwarna seperti kuning telur, air berada di bawah berwarna sperti kuning telur Langsung memisah setelah 6 detik
H. PEMBAHASAN
Pada saat praktikum, minyak yang digunakan adalah minyak yang masih dalam kondisi baik bukan minyak bekas, sehingga warnanya masih kuning dan bening. Dan telur yang digunakan adalah telur yang sudah dikocok, sehingga bagian albumin (putih telur) sudah bercampur dengan bagian yolk (kuning telur).
Perbandingan pencampuran yang dilakukan pada saat praktikum adalah, pada pencampuran 1 (air + minyak) perbandingan yang dilakukan adalah ( 3 : 1 ), yaitu air sebanyak 60 mL, dicampurkan dengan minyak sebanyak 20 mL.
Sedangkan untuk pencampuran 2 (air + minyak + telur), perbandingan yang dilakukan sebanyak ( 3 : 1 : ½ ), yaitu air sebanyak 60 mL, yang dicampurkan dengan minyak sebanyak 20 mL, dan ditambahkan dengan 10 mL telur yang sudah dikocok, pengocokan telur ini dimaksudkan untuk mempermudah proses pencampuran.
Pada pencampuran 1, yaitu antara air dengan minyak, pada saat pengadukan dengan menggunakan batang pengaduk, minyak dan air sulit sekali bercampur, meskipun pengadukan dilakukan secara konstan dan terus-menerus, setelah didiamkan pun campuran ke 2 jenis cairan tersebut cepat sekali terpisah, hanya dalam waktu sekitar 15 detik, campuran minyak dengan air sudah sedikit berubah, meskipun tidak lagi berwarna bening, air yang berada pada lapisan paling bawah berwarna putih kusam dan terdapat sedikit gelembung-gelembung minyak.
Sedangkan minyak, berada pada lapisan paling atas, sama halnya seperti air, minyak pun mengalami perubahan warna setelah pencampuran, warna minyak menjadi lebih pucat dan terdapat gelembung-gelembung udara. Hal tersebut terjadi karena selisih berat jenis antara minyak dengan air, cukup besar sehingga memperhambat proses pencampuran. Berat jenis minyak lebih rendah dari 1, jadi pada saat pencampuran dilakukan minyak langsung berada di bagian atas.
Pada pencampuran 2 (air + minyak + telur), pada saat minyak ditambahkan ke dalam air, ke 2 campuran ini juga terpisah, minyak yang bersifat non polar, tidak dapat larut pada air yang bersifat polar, akan tetapi minyak larut pada jenis cairan organik, seperti alcohol, etanol, eter, dll.
Setelah ditambahkan telur, campuran antara air dan minyak sedikit berubah, perubahan yang terjadi adalah warna pada minyak dan air, keduanya sama-sama berwarna kuning seperti warna pada kuning telur, setelah diaduk secara konstan dan terus-menerus kemudian didiamkan, campuran 3 jenis cairan ini (air + minyak + telur), membutuhkan waktu yang lebih lama untun memisah daripada campuran 1 (air + minyak), pada pencampuran 2, setelah 43 detik baru mulai membentuk 2 lapisan, itu pun terlihat samar, setelah kurang lebih 15 menit, kedua lapisan yang terbentuk mulai terlihat nyata.
Pencampuran 2 waktu yang dibutuhkan untuk memisah cukup lama, hal ini dikarenakan telur yang ditambahkan pada pencampuran merupakan sumber protein, protein dalam telur mengikat air dan minyak dalam campuran sehingga keduanya jadi sedikit bercampur. Dalam hal ini telur yang mengandung protein tersebut berperan sebagai emulsifier
Pada proses pemisahan dengan centrifuse, campuran yang digunakan adalah pencampuran yang ke 2, yaitu campuran antara air, minyak, dan telur. Campuran dimasukan ke dalam alat centrifuse manual selama kurang lebih 3 menit, secara konstan.
Setelah dikeluarkan dari alat centrifuse, campuran tersebut langsung memisah dalam waktu kurang lebih 6 detik, centrifuse itu sendiri berfungsi memisahkan campuran berdasarkan berat jenis, bahan yang mempunyai berat jenis yang paling tinggi akan berada menjauhi titik pusat centrifuse, sedangkan bahan dengan berat jenis rendah akan berada mendekati titik pusat centrifuse.
Sehingga air yang mempunyai berat jenis paling tinggi diantara bahan lain yang dicampurkan, posisinya berada paling jauh dari titik pusat centeifuse,sedangkan minyak berada paling dekat dengan titik pusat centrifuse. Untuk telur, bahan ini sudah bercampur dengan air maupun minyak, sehingga telur ada baik pada lapisan air yang menjauhi titik pusat centrifuse, maupun lapisan minyak yang dekat dengan titik pusat centrifuse.
Akan tetapi setelah dikeluarkan dari alat centrifuse, dan dikocok dengan tangan, campuran minyak, air, telur langsung bercampur dan sulit sekali untuk terpisah. Hal tersebut dikarenakan bahan telur yang sudah ada baik pada lapisan minyak maupun air akan saling mengikat lagi dan membuat campuran antara air dan minyak menjadi homogen.
I. KESIMPULAN
Dari 2 campuran diatas, maka dapat diketahui :
Campuran antara air + minyak akan memisah karena selisih berat jenis pada ke 2 bahan sangat besar.
Campuran antara minyak + air akan memberikan efek yang sama, seperti campuran di atas.
Campuran air + minyak dan sebaliknya, akan bercampur apabila ditambahkan bahan dengan kandungan protein tinggi, seperti telur. Karena protein akan mengikat air dan minyak pada campuran, sehingga campuran dapat homogen atau terdispersi sempurna.
Selisih berat jenis yang besar akan mempermudah proses pemisahan
J. DAFTAR PURTAKA
Setiahartini, Srie . 1977 . PENGOLAHAN HASIL PERTANIAN jilid 1 . Depdikbud
www.ilmupangan.com
Praktikum pencampuran dan pemisahan
B. PRINSIP
• Pencampuran : menyatukan dua bahan atau lebih, sehingga bahan mencampur atau terdispersi sempurna.
• Pemisahan : mengambil komponen dari suatu bahan campuran
C. TUJUAN
Mengetahui karekteristik bahan pada saat dicampurkan dan dipisahkan.
D. DASAR TEORI
• PENCAMPURAN (MIXING)
Pencampuran adalah penyebaran satu partikel lain untuk mendapatkan penyebaran partikel-partikel lain yang merata satu sama lain. Proses pencampuran ini umum dijumpai sebagai salah satu unit pengolahan hasil-hasil pertanian. Proses pencampuran merupakan salah satu proses yang paling sulit dimengerti dan sulit diperhitungkan daripada pengertian secara deskripsi.
Pencampuran digunakan untuk mempersiapkan kombinasi yang seragam dari 2 atau lebih bahan. Bahan yang dicampurkan dapat berbentuk cair, padat, atau gas. Kombinasi bahan-bahan tersebut antara lain 2 atau lebih bahan padat, cair, atau gas, 2 atau lebih bahan cair serta bahan cair dan padat.
Hasil pencampuran dapat merupakan campuran yang homogen seperti campuran bahan-bahan cair yang larut satu sama lain dan campuran yang heterogen seperti campuran bahan padat yang kering.
Proses pencampuran mengalami hambatan apabila partikel-partikel yang dicampurkan berukuran dan berbentuk sama, akan tetapi berbeda berat jenisnya. Partikel-partikel yang berat cenderung untuk tetap tinggal di dasar wadah selama proses pencampuran. Partikel yang berbentuk bulat dan berukuran kecil cenderung naik ke permukaan. Kecenderungan ini dapat dilawan dengan mengangkat bahan tersebut ke permukaan wadah atau ke tengah-tengah campuran.
Suatu proses pencampuran dianggap berhasil apabila memenuhi hal-hal berikut :
• Hasil campuran seragan
• Waktu proses pencampuran singkat
• Biaya proses pencampuran dan upah buruh rendah
Pencampuran yang sempurna apabila contoh-contoh yang ditarik dari campuran memberikan persentase kandungan masing-masing komponen sesuai yang dikehendaki dan untuk persentase contoh yang satu dengan yang lain sama, atau hampir sama, sehingga dapat dianggap persentase tersebut berlaku untuk semua campuran.
Mesin pencampur dapat dikelompokkan atas 3 kelas besar, yaitu :
• Pencampur kipas pada pencampuran bahan cair
Pada pencampur kipas, aliran bahan cair dipertahankan oleh kipas yang berputar. Kapasitas yang cukup diperoleh dengan mengatur volume aliran sehingga seluruhnya dapat tergerakkan pada suatu satuan waktu yang tertentu.
Pencampuran terjadi apabila aliran berkecepatan tinggi berhubungan dengan bahan cair yang tergerak lambat.
Pola aliran selama pencampuran, tergantung dari jenis kipas yang digunakan, jenis pencampur kipas ini antara lain : kipas pengaduk, turbin, dan baling-baling, pola aliran bahan cair pada proses pencampuran berbeda akibat adanya penahan pada wadah.
• Pencampur untuk bahan kental (pasta)
Pencampuran bahan-bahan yang sangat kental, sangat bervariasi antara satu pencampuran dengan pencampuran lainnya. Semua tipe alat pencampur bahan berbentuk pasta beroperasi dengan kerja yang langsung pada bahan yang berdekatan pada elemen pencampur. Pengaduk berhubungan langsung dengan seluruh bahan atau bahan harus kena (kontak) dengan pengaduk. Peralatan pencampur ini pada umumnya berat dan membutuhkan banyak tenaga.
Alat pencampur pasta yang umum dipergunakan adalah mesin peramas (Kneader Machine). Alat ini terdiri dari 2 lengan berbentuk khas yang berputar berlawanan arah. Gerakan lengan ini melipat dan mengiris bahan terdapat di dalam wadah. Lengan ini juga berputar dengan kecepatan yang berbeda.
• Pencampur partikel padat
Alat pencampur pasta dapat juga dipergunakan untuk mencampurkan partikel-partikel padat. Prinsip alat pencampur partikel ini adalah menggantikan atau memindahlan bagian-bagian yang berbeda satu sama lain sehingga proses pencampuran menjadi lebih sederhana.
Proses pencampuran lebih sederhana terutama apabila secara kasar perbandingan bahan yang akan dicampur seimbang. Proses pencampuran dianggap selesai apabila rata-rata hasil analisa contoh yang ditarik telah mempunyai perbandingan sesuai dengan yang diingini.
• PERISTIWA PINDAH MASA
Peristiwa pindah massa terjadi terutama pada pemisahan suatu bahan ke dalam komponen-komponennya. Campuran bahan dapat dipisahkan secara mekanis seperti filtrasi bahan padat dari campuran padat cair. Cara pemisahan yang lain ialah dengan peristiwa pindah massa yang diikuti oleh perubahan konsentrasi.
Peristiwa pindah massa ditandai oleh pindah massa suatu molekul komponen dari suatu fasa ke fasa yang lain. Pindah massa akan menyebabkan perubahan konsentrasi tinggi ke daerah dengan konsentrasi rendah.
Pada umumnya operasi pindah massa dikelompokan menurut cara pindah massa itu terjadi. Secara umum operasi pindah massa dapat dikelompokkan sebagai berikut :
Pindah massa antara 2 fasa yang tidak saling larut
1. fasa gas – gas : pemisahan komponen-komponennya dapat pula dilakukan walaupun sangat sukar, misalnya dengan cara adsorpsi menggunakan adsorbent tertentu. Komponen yang tidak diinginkan akan terserap pada adsorbent.
2. fasa gas – cair : pemisahan dapat dilakukan dengan mengembunkan uap secara destilasi atau dengan absobsi fasa gas.
3. fasa gas – padat : molekul-molekul fasa padat terdispersi di udara, kadang-kadang fasa padat membentuk fasa cair terlebih dahulu, sering kali fasa padat langsung membentuk fasa gas.
4. fasa cair – cair : pemisahan dilakukan dengan operasi ekstraksi, yaitu operasi dengan menggunakan bahan pelarut cair.
5. fasa cair – padat : pemisahan dilakukan dengan membuat larutan lewat jenuh misalnya dengan penguapan larutan atau penurunan suhu larutan.
6. fasa padat – padat : dipisahkan secara mekanis yaitu dengan menggunakan ayakan, pengendapan, atau meniupkan udara pada bahan.
Pindah massa melalui selaput membrane
Selaput membran adalah selaput tipis yang dapat memisahkan campuran yang saling larut. Dengan aliran hidrodinamik salah satu komponen bergerak melewati selaput dan komponen yang lain tak dapat lewat.
Pindah massa antara 2 fasa yang saling larut
2 fasa yang saling larut dipisahkan secara difusi. Molekul yang lebih berat akan cenderung untuk mengumpul pada bagian bawah alat.
Pindah massa Karena perbedaan tegangan permukaan
Operasi pembusaan dapat dilakukan untuk memisahkan sabun dari air.
Tekhnik pemisahan, di antaranya adalah tehknik destilasi, ekstraksi, kristalisasi, humidifikasi, adsorpsi dan desorpsi.
E. ALAT DAN BAHAN
• Alat
Centrifuse Machine (manual)
Beaker glass 250 mL
Batang pengaduk
Gelas ukur 100 mL
Tabung reaksi plastik bertutup
• Bahan
Minyak goreng
Air
Telur
F. PROSEDUR
Membuat campuran
1. air + minyak ( 1 : 3 )
2. air + minyak + telur ( 3 : 1 : ½ )
mengaduk masing-masing campuran, dengan menggunakan batang pengaduk sampai homogen.
Mendiamkan campuran selama 15 s/d 20 menit.
Mengamati campuran 1 dan 2.
Memasukan campuran 2 ke dalam tabung reaksi plastik bertutup
Memutarnya campuran dalam tabung menggunakan centrifuse, selama 3 menit.
Mengamati campuran dalam tabung setelah dikelurkan dari centrifuse.
G. DATA PENGAMATAN
Tabel I, pencampuran dengan pengadukan manual
JENIS CAMPURAN KONDISI / KENAMPAKAN KETERANGAN
Air + Minyak terdapat 2 lapisan, minyak berada di atas berwarna kuning keruh, air berada di bawah berwarna putih kekeruhan. Tidak dapat bercampur, langsung terpisah setelah 15 detik
Air + Minyak + telur Terdapat 2 lapisan agak samara, minyak berada di atas, berwarna kuning seperti telur, air berada di bawah berwarna kuning seperti telur Tidak dapat bercampur, pada 43 detik, mulai terlihat pemisahan
Tabel II, pemisahan dengan centrifuse manual
JENIS CAMPURAN KONDISI / KENAMPAKAN KETERANGAN
Air + Minyak + telur Terdapat 2 lapisan yang memisah dengan sangat jelas, minyak berada di atas berwarna seperti kuning telur, air berada di bawah berwarna sperti kuning telur Langsung memisah setelah 6 detik
H. PEMBAHASAN
Pada saat praktikum, minyak yang digunakan adalah minyak yang masih dalam kondisi baik bukan minyak bekas, sehingga warnanya masih kuning dan bening. Dan telur yang digunakan adalah telur yang sudah dikocok, sehingga bagian albumin (putih telur) sudah bercampur dengan bagian yolk (kuning telur).
Perbandingan pencampuran yang dilakukan pada saat praktikum adalah, pada pencampuran 1 (air + minyak) perbandingan yang dilakukan adalah ( 3 : 1 ), yaitu air sebanyak 60 mL, dicampurkan dengan minyak sebanyak 20 mL.
Sedangkan untuk pencampuran 2 (air + minyak + telur), perbandingan yang dilakukan sebanyak ( 3 : 1 : ½ ), yaitu air sebanyak 60 mL, yang dicampurkan dengan minyak sebanyak 20 mL, dan ditambahkan dengan 10 mL telur yang sudah dikocok, pengocokan telur ini dimaksudkan untuk mempermudah proses pencampuran.
Pada pencampuran 1, yaitu antara air dengan minyak, pada saat pengadukan dengan menggunakan batang pengaduk, minyak dan air sulit sekali bercampur, meskipun pengadukan dilakukan secara konstan dan terus-menerus, setelah didiamkan pun campuran ke 2 jenis cairan tersebut cepat sekali terpisah, hanya dalam waktu sekitar 15 detik, campuran minyak dengan air sudah sedikit berubah, meskipun tidak lagi berwarna bening, air yang berada pada lapisan paling bawah berwarna putih kusam dan terdapat sedikit gelembung-gelembung minyak.
Sedangkan minyak, berada pada lapisan paling atas, sama halnya seperti air, minyak pun mengalami perubahan warna setelah pencampuran, warna minyak menjadi lebih pucat dan terdapat gelembung-gelembung udara. Hal tersebut terjadi karena selisih berat jenis antara minyak dengan air, cukup besar sehingga memperhambat proses pencampuran. Berat jenis minyak lebih rendah dari 1, jadi pada saat pencampuran dilakukan minyak langsung berada di bagian atas.
Pada pencampuran 2 (air + minyak + telur), pada saat minyak ditambahkan ke dalam air, ke 2 campuran ini juga terpisah, minyak yang bersifat non polar, tidak dapat larut pada air yang bersifat polar, akan tetapi minyak larut pada jenis cairan organik, seperti alcohol, etanol, eter, dll.
Setelah ditambahkan telur, campuran antara air dan minyak sedikit berubah, perubahan yang terjadi adalah warna pada minyak dan air, keduanya sama-sama berwarna kuning seperti warna pada kuning telur, setelah diaduk secara konstan dan terus-menerus kemudian didiamkan, campuran 3 jenis cairan ini (air + minyak + telur), membutuhkan waktu yang lebih lama untun memisah daripada campuran 1 (air + minyak), pada pencampuran 2, setelah 43 detik baru mulai membentuk 2 lapisan, itu pun terlihat samar, setelah kurang lebih 15 menit, kedua lapisan yang terbentuk mulai terlihat nyata.
Pencampuran 2 waktu yang dibutuhkan untuk memisah cukup lama, hal ini dikarenakan telur yang ditambahkan pada pencampuran merupakan sumber protein, protein dalam telur mengikat air dan minyak dalam campuran sehingga keduanya jadi sedikit bercampur. Dalam hal ini telur yang mengandung protein tersebut berperan sebagai emulsifier
Pada proses pemisahan dengan centrifuse, campuran yang digunakan adalah pencampuran yang ke 2, yaitu campuran antara air, minyak, dan telur. Campuran dimasukan ke dalam alat centrifuse manual selama kurang lebih 3 menit, secara konstan.
Setelah dikeluarkan dari alat centrifuse, campuran tersebut langsung memisah dalam waktu kurang lebih 6 detik, centrifuse itu sendiri berfungsi memisahkan campuran berdasarkan berat jenis, bahan yang mempunyai berat jenis yang paling tinggi akan berada menjauhi titik pusat centrifuse, sedangkan bahan dengan berat jenis rendah akan berada mendekati titik pusat centrifuse.
Sehingga air yang mempunyai berat jenis paling tinggi diantara bahan lain yang dicampurkan, posisinya berada paling jauh dari titik pusat centeifuse,sedangkan minyak berada paling dekat dengan titik pusat centrifuse. Untuk telur, bahan ini sudah bercampur dengan air maupun minyak, sehingga telur ada baik pada lapisan air yang menjauhi titik pusat centrifuse, maupun lapisan minyak yang dekat dengan titik pusat centrifuse.
Akan tetapi setelah dikeluarkan dari alat centrifuse, dan dikocok dengan tangan, campuran minyak, air, telur langsung bercampur dan sulit sekali untuk terpisah. Hal tersebut dikarenakan bahan telur yang sudah ada baik pada lapisan minyak maupun air akan saling mengikat lagi dan membuat campuran antara air dan minyak menjadi homogen.
I. KESIMPULAN
Dari 2 campuran diatas, maka dapat diketahui :
Campuran antara air + minyak akan memisah karena selisih berat jenis pada ke 2 bahan sangat besar.
Campuran antara minyak + air akan memberikan efek yang sama, seperti campuran di atas.
Campuran air + minyak dan sebaliknya, akan bercampur apabila ditambahkan bahan dengan kandungan protein tinggi, seperti telur. Karena protein akan mengikat air dan minyak pada campuran, sehingga campuran dapat homogen atau terdispersi sempurna.
Selisih berat jenis yang besar akan mempermudah proses pemisahan
J. DAFTAR PURTAKA
Setiahartini, Srie . 1977 . PENGOLAHAN HASIL PERTANIAN jilid 1 . Depdikbud
www.ilmupangan.com
ANALISA Staphylococcus DALAM PANGAN
A. ACARA
Melakukan analisa Staphylococcus dalam sample produk pangan.
B. PRINSIP
Menganalisa dan mengidentifikasi koloni bakteri Staphylococcus dengan menggunakan mikroskop binokuler.
C. TUJUAN
Untuk mengetahui adanya staphylococcus dalam produk pangan serta agar mampu mengidentifikasi bentuk maupun karakteristik dari Staphylococcus.
D. TINJAUAN PUSTAKA
Bakteri merupakan mikroba uniseluler, yang termasuk dalam kelas Schizomycetes, tidak mempunyai klorofil, dan reproduksi secara aseksual dengan cara pembelahan sel. Hidup bebas, parasitic, saprofitik atau sebagai pathogen pada manusia, hewan dan tanaman.
Komponen bakteri :
• Flagella
tidak semua bakteri memiliki flagella, tetapi bakteri yang berbentuk batang (bacil) memiliki flagella, yang berfungsi sebagai alat gerak.
• Kapsul
beberapa bakteri diselimuti oleh zat seperti lender (gelatinous) yang disebut kapsul, strukturnya bisa tipis atau tebal. Berfungsi untuk melindungi diri dari kondisi yang tidak menguntungkan.
• Dinding sel
dinding sel bias membentuk bentuk sel, bersifat seperti membran permeable selektif dan mempunyai fungsi yang sangat penting dalam aktivitas sel.
• Membran sitoplasma
Bersifat permeable yang berfungsi untuk mengontrol masuknya bahan makanan ke dalam sel dan pembuangan hasil buangan ke luar sel).
• Nukleus (Inti sel)
Inti sel terlihat pada bakteri setelah bakteri diberi pewarna khusus, komposisi dan densitasnya hmspir sama dengan komposisi dan densitas sitoplasma.
• Granula
Merupakan endapan volutin 9senyawa N), karbohidrat atau lemak dalam sitoplasma yang berfungsi sebagai persediaan makanan bagi sel.
• Vakuola
Pada sel bakteri dewasa, cadangan makanan yang dibuat dalam sel akan larut dalam vakuola, sedangkan yang tidak larut akan mengendap di dalam sitoplasma.
Bakteri memerlukan air yang lebih banyak dibandingkan dengan kapang dan khamir, sebagian besar dapat tumbuh pada Aw = 1,00 dan juga dapat tumbuh pada kadar garam dan gula dengan konsentrasi gula dan garam rendah. , kecuali pada bakteri yang toleran terhadap kadar garam dan gula dengan konsentrasi tinggi.
Staphylococcus aureus merupakan kelompok bakteri gram positif, tidak bergerak ditemukan satu-satu, berpasangan, berantai pendek atau bergerombol, tidak membentuk spora, tidak berkapsul, dan dinding selnya mengandung dua komponen utama yaitu peptidoglikan dan asam teikhoat. Proses metabolisme bakteri ini Metabolisme dapat dilakukan secara aerob dan anaerob.
Infeksi yang diakibatkan dapat di golongkan sebagai penyakit menular atau lokal (biasanya) atau menyebar (jarang). Staphylococcus merupakan sel yang berbentuk bola dengan garis tengah sekitar 1µm dan tersusun dalam kelompok tak beraturan. Staphylococcus aureus menghasilkan koagulase,suatu protein mirip enzim yang dapat menggumpalkan plasma yang telah diberi oksalat atau sitrat dengan bantuan suatu faktor yang terdapat dalam banyak serum. Bakteri yang membentuk koagulase dianggap mempunyai potensi menjadi patogen invasif.
Staphylococcus aureus dapat ditemukan di kulit dan di hidung manusia. Hidung biasanya dianggap tempat utama berkembangnya kolonisasinya dan ada kalanya dapat menyebabkan infeksi dan sakit parah. nekrosis tulang dan penanahan menahun.
Staphylococcus aureus juga dapat menyebabkan penyebab intoksitasi dan terjadinya berbagai macam infeksi seperti pada jerawat, bisul, juga pneumonia, empiema, endokarditis, atau penanahan pada bagian tubuh mana pun Leukosidin; toksin Staphylococcus aureus ini dapat mematikan sel darah putih pada banyak hewan yang terkena oleh toksin ini, tetapi peranannya dalam patogenesis tidak jelas, sebab staphylococcus patogen tidak mematikan sel-sel darag putih dan dapat difagositosis seefektif jenis yang tidak patogen, namun bakteri tersebut mampu berkembang biak dengan sangat aktif di dalam sel.
E. ALAT DAN BAHAN
• Alat
o cawan Petri
o mikro pipet dan tip
o incubator
o pipet ukur 25 mL
o pipet ukur 1 mL
o spatula
o Erlenmeyer 500 mL
o hot plate
o magnetic stirrer
o autoklaf
o beaker glass
o tabung reaksi
o kapas
o pembakar spiritus
o botol sample
o vortex
o neraca analitik
o thermometer.
• Bahan
o Aquadest
o sample susu
o media NA (Nutrient Agar).
F. PROSEDUR KERJA
• Pembuatan Media
1. mencampurkan 11,5 gram serbuk NA dalam 0,5 liter aquadest.
2. memanaskannya di atas hot plate, sambil diaduk dengan menggunakan magnetic stirrer, hingga seluruh bahan homogen
• Sterilisasi Peralatan dan Media.
1 menyiapkan semua alat dan bahan yang dibutuhkan, beserta media.
2. mensterilisasi semua alat dan bahan beserta media yang akan digunakan di dalam autoklaf dalam suhu 121oC 1 atm selama 15 menit.
• Homogenisasi contoh dan Pengenceran
1. memipet sample susu sebanyak 25 mL ke dalam botol sample yang telah berisi 225 mL larutan pengencer. Mengocok sample dalam botol hingga homogen (25 kali)
2. membuat pengenceran dari 10-1 hingga diperoleh pengenceran yang diperlukan.
• Perbenihan
1. memipet 1 mL dari masing-masing pengenceran ke dalam cawan Petri steril secara simplo dan duplo
2. menuangkan media NA sebanyak 12-15 mL ke dalam cawan Petri (media telah dicairkan pada suhu 45oC ± 1oC dalam waktu 15 menit dari pengenceran pertama
3. menggoyangkan cawan Petri dengan hati-hati (memutar dan menggoyangkan ke depan dan ke belakang serta ke kanan dan ke kiri) hingga contoh tercampur rata dengan media.
4. mengerjakan pemeriksaan blanko dengan menuangkan media ke dalam cawan Petri.
5. memasukkan semua cawan Petri dengan posisi terbalik ke dalam incubator dan diinkubasikan pada suhu 35±1oC selama 48 jam.
6. mengamati bakteri Staphylococcus di bawah mikroskop.
G. DATA PENGAMATAN
PENGENCERAN JUMLAH KOLONI KET
10-2 2
10-3 3
10-4 6
10-5 - Terkontaminasi jamur
H. PEMBAHASAN
sample yang dipergunakan saat praktikum adalah susu, susu yang dipergunakan adalah susu bayi yang sudah rusak, dan diperkirakan dalam susu tersebut terkandung bakteri jenis Staphylococcus aureus.
Bakteri akan tumbuh dengan baik pada media yang disesuaikan dengan jenis bakterinya. Pada inokulasi bakteri Staphylucoccus aureus, media yang dipergunakan seharusnya merupakan media yang spesifik, akan tetapi saat praktikum media yang dipergunakan adalah media NA (nutrient Agar), media NA memang sering dipergunakan untuk menumbuhkan berbagai jenis bakteri pada umumnya, padahal dengan media yang lebih spesifik akan dapat menumbuhkan bakteri dengan maksimal.
Seperti yang sudah diketahui bahwa Staphylococcus aureus adalah bakteri gram positif, tidak bergerak ditemukan satu-satu, berpasangan, berantai pendek atau bergerombol, tidak membentuk spora, tidak berkapsul, dan dinding selnya mengandung dua komponen utama yaitu peptidoglikan dan asam teikhoat. Metabolisme dapat dilakukan secara aerob dan anaerob. Penyusunan bakteri yang berbentuk coccus seperti Stapylococcus ini dihasilkan oleh pembian yang disebut “binary fission”, yaitu satu sel bakteri akan membeleh diri dan akan membentuk dua sel baru.
Seperti yang sudah disebutkan bahwa tujuan utama dari praktikum ini adalah mengidentifikasi bakteri Staphylococcus aureus dalam sample, sehingga sebenarnya proses perhitungan bakteri tiap pengeneran tidak terlalu diperlukan.
Proses pengenceran dilakukan sampai 10-5, dan setiap pengenceran dilakukan simplo (1 kali). Semua proses dilakukan secara asepris untuk menghindari kontaminasi dari mikroba lain. Setelah cawan berisi larutan sample dan pengencer selanjutnya ditambahkan dengan media NA hangat, kondisi yang terlalu panas akan menyebabkan bakteri yang akan diidentifikasi mati, sedangkan pada kondisi dingin media akan mengeras dan menyulitkan untuk dituangkan ke dalam cawan.
Setelah cawan berisi media, maka proses selnajutnya adalah dibiarkan sampai media mengeras, setelah media mengeras kemudian dimasukan dalam incubator dengan suhu inkubasi ± 37oC selama 48 jam (2 hari). Cawan dalam posisi terbalik (bagian atas cawan dibawah) ketika dimasukan dalam incubator.
Berdasarkan hasil praktikum dan pengamatan, saat praktikum analisa staphylucoccus aureus dengan menggunakan mikroskop tidak dapat diidentifikasi, pada lensa mikroskop tidak terlihat bentuk bakteri stapylococcus yang berdasarkan teori berbentuk seperti rantai atau anggur. Sehingga proses identifikasi tentang bakteri ini tidak dapat dilakukan secara menyeluruh. Jenis bakteri dalam media NA pun tidak dapat diketahui karena media yang dipergunakan adalah media umum untuk menumbuhkan bakteri sehingga jenis bakteri yang tumbuh pun tidak dapat diketahui.
Hal tersebut dapat disebabkan karena media yang dipergunakan bukan media spesifik staphylococcus aureus, melainkan media NA sehingga bakteri yang tumbuh kemungkinan besar adalah bakteri mesofil lain yang juga dapat tumbuh pada media yang sama, seharusnya proses identifikasi dilakukan dengan menggunakan media spesifik berdasarkan jenis bekteri yang akan diidentifikasi, sehingga hasil dari identifikasi tidak salah dan bektri yang tumbuh dapat diiperkirakan semuanya adalah bakteri yang dimaksud.
I. KESIMPULAN
Berdasarkan hasil praktikum yang telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa Staphylococcus merupakan salah satu bakteri mesofil aerob yang berbentuk coccus (bulatan). Bakteri ini dapat ditumbuhkan pada media agar, karena nutrisi utama yang dibutuhkan adalah protein. Bakteri ini tumbuh pada suhu ± 37oC sehingga diinkubasikan pada suhu yang sama, Staphylococcus aureus merupakan bakteri gram positif. Dalam pengamatan jika dialkukan di bawah mikroskop bakteri ini berbentuk bulatan-bulatan bergerombol seperti rantai atau anggur.
J. DAFTAR PUSTAKA
• Dwidjoseputro. 2005. Dasar-dasar Mikrobiologi. Jakarta : Penerbit Djambatan.
• Supardi, Imam. 1999. Mikrobiologi Dalam Pengolahan dan Keamanan Pangan. Bandung : Yayasan Adikarya Ikapi
• Jennie, Betty Sri Laksmi. 1978. Mikrobiologi Hasil Pertanian. Jakarta : Departemen Pendidikan dan Kebudayaan
• Muctadi, Deddy. 1980. Petunjuk Praktik Mikrobiolgi Hasil Pertanian. Jakarta: Departemen Pendidikan dan Kebudayaan.
Melakukan analisa Staphylococcus dalam sample produk pangan.
B. PRINSIP
Menganalisa dan mengidentifikasi koloni bakteri Staphylococcus dengan menggunakan mikroskop binokuler.
C. TUJUAN
Untuk mengetahui adanya staphylococcus dalam produk pangan serta agar mampu mengidentifikasi bentuk maupun karakteristik dari Staphylococcus.
D. TINJAUAN PUSTAKA
Bakteri merupakan mikroba uniseluler, yang termasuk dalam kelas Schizomycetes, tidak mempunyai klorofil, dan reproduksi secara aseksual dengan cara pembelahan sel. Hidup bebas, parasitic, saprofitik atau sebagai pathogen pada manusia, hewan dan tanaman.
Komponen bakteri :
• Flagella
tidak semua bakteri memiliki flagella, tetapi bakteri yang berbentuk batang (bacil) memiliki flagella, yang berfungsi sebagai alat gerak.
• Kapsul
beberapa bakteri diselimuti oleh zat seperti lender (gelatinous) yang disebut kapsul, strukturnya bisa tipis atau tebal. Berfungsi untuk melindungi diri dari kondisi yang tidak menguntungkan.
• Dinding sel
dinding sel bias membentuk bentuk sel, bersifat seperti membran permeable selektif dan mempunyai fungsi yang sangat penting dalam aktivitas sel.
• Membran sitoplasma
Bersifat permeable yang berfungsi untuk mengontrol masuknya bahan makanan ke dalam sel dan pembuangan hasil buangan ke luar sel).
• Nukleus (Inti sel)
Inti sel terlihat pada bakteri setelah bakteri diberi pewarna khusus, komposisi dan densitasnya hmspir sama dengan komposisi dan densitas sitoplasma.
• Granula
Merupakan endapan volutin 9senyawa N), karbohidrat atau lemak dalam sitoplasma yang berfungsi sebagai persediaan makanan bagi sel.
• Vakuola
Pada sel bakteri dewasa, cadangan makanan yang dibuat dalam sel akan larut dalam vakuola, sedangkan yang tidak larut akan mengendap di dalam sitoplasma.
Bakteri memerlukan air yang lebih banyak dibandingkan dengan kapang dan khamir, sebagian besar dapat tumbuh pada Aw = 1,00 dan juga dapat tumbuh pada kadar garam dan gula dengan konsentrasi gula dan garam rendah. , kecuali pada bakteri yang toleran terhadap kadar garam dan gula dengan konsentrasi tinggi.
Staphylococcus aureus merupakan kelompok bakteri gram positif, tidak bergerak ditemukan satu-satu, berpasangan, berantai pendek atau bergerombol, tidak membentuk spora, tidak berkapsul, dan dinding selnya mengandung dua komponen utama yaitu peptidoglikan dan asam teikhoat. Proses metabolisme bakteri ini Metabolisme dapat dilakukan secara aerob dan anaerob.
Infeksi yang diakibatkan dapat di golongkan sebagai penyakit menular atau lokal (biasanya) atau menyebar (jarang). Staphylococcus merupakan sel yang berbentuk bola dengan garis tengah sekitar 1µm dan tersusun dalam kelompok tak beraturan. Staphylococcus aureus menghasilkan koagulase,suatu protein mirip enzim yang dapat menggumpalkan plasma yang telah diberi oksalat atau sitrat dengan bantuan suatu faktor yang terdapat dalam banyak serum. Bakteri yang membentuk koagulase dianggap mempunyai potensi menjadi patogen invasif.
Staphylococcus aureus dapat ditemukan di kulit dan di hidung manusia. Hidung biasanya dianggap tempat utama berkembangnya kolonisasinya dan ada kalanya dapat menyebabkan infeksi dan sakit parah. nekrosis tulang dan penanahan menahun.
Staphylococcus aureus juga dapat menyebabkan penyebab intoksitasi dan terjadinya berbagai macam infeksi seperti pada jerawat, bisul, juga pneumonia, empiema, endokarditis, atau penanahan pada bagian tubuh mana pun Leukosidin; toksin Staphylococcus aureus ini dapat mematikan sel darah putih pada banyak hewan yang terkena oleh toksin ini, tetapi peranannya dalam patogenesis tidak jelas, sebab staphylococcus patogen tidak mematikan sel-sel darag putih dan dapat difagositosis seefektif jenis yang tidak patogen, namun bakteri tersebut mampu berkembang biak dengan sangat aktif di dalam sel.
E. ALAT DAN BAHAN
• Alat
o cawan Petri
o mikro pipet dan tip
o incubator
o pipet ukur 25 mL
o pipet ukur 1 mL
o spatula
o Erlenmeyer 500 mL
o hot plate
o magnetic stirrer
o autoklaf
o beaker glass
o tabung reaksi
o kapas
o pembakar spiritus
o botol sample
o vortex
o neraca analitik
o thermometer.
• Bahan
o Aquadest
o sample susu
o media NA (Nutrient Agar).
F. PROSEDUR KERJA
• Pembuatan Media
1. mencampurkan 11,5 gram serbuk NA dalam 0,5 liter aquadest.
2. memanaskannya di atas hot plate, sambil diaduk dengan menggunakan magnetic stirrer, hingga seluruh bahan homogen
• Sterilisasi Peralatan dan Media.
1 menyiapkan semua alat dan bahan yang dibutuhkan, beserta media.
2. mensterilisasi semua alat dan bahan beserta media yang akan digunakan di dalam autoklaf dalam suhu 121oC 1 atm selama 15 menit.
• Homogenisasi contoh dan Pengenceran
1. memipet sample susu sebanyak 25 mL ke dalam botol sample yang telah berisi 225 mL larutan pengencer. Mengocok sample dalam botol hingga homogen (25 kali)
2. membuat pengenceran dari 10-1 hingga diperoleh pengenceran yang diperlukan.
• Perbenihan
1. memipet 1 mL dari masing-masing pengenceran ke dalam cawan Petri steril secara simplo dan duplo
2. menuangkan media NA sebanyak 12-15 mL ke dalam cawan Petri (media telah dicairkan pada suhu 45oC ± 1oC dalam waktu 15 menit dari pengenceran pertama
3. menggoyangkan cawan Petri dengan hati-hati (memutar dan menggoyangkan ke depan dan ke belakang serta ke kanan dan ke kiri) hingga contoh tercampur rata dengan media.
4. mengerjakan pemeriksaan blanko dengan menuangkan media ke dalam cawan Petri.
5. memasukkan semua cawan Petri dengan posisi terbalik ke dalam incubator dan diinkubasikan pada suhu 35±1oC selama 48 jam.
6. mengamati bakteri Staphylococcus di bawah mikroskop.
G. DATA PENGAMATAN
PENGENCERAN JUMLAH KOLONI KET
10-2 2
10-3 3
10-4 6
10-5 - Terkontaminasi jamur
H. PEMBAHASAN
sample yang dipergunakan saat praktikum adalah susu, susu yang dipergunakan adalah susu bayi yang sudah rusak, dan diperkirakan dalam susu tersebut terkandung bakteri jenis Staphylococcus aureus.
Bakteri akan tumbuh dengan baik pada media yang disesuaikan dengan jenis bakterinya. Pada inokulasi bakteri Staphylucoccus aureus, media yang dipergunakan seharusnya merupakan media yang spesifik, akan tetapi saat praktikum media yang dipergunakan adalah media NA (nutrient Agar), media NA memang sering dipergunakan untuk menumbuhkan berbagai jenis bakteri pada umumnya, padahal dengan media yang lebih spesifik akan dapat menumbuhkan bakteri dengan maksimal.
Seperti yang sudah diketahui bahwa Staphylococcus aureus adalah bakteri gram positif, tidak bergerak ditemukan satu-satu, berpasangan, berantai pendek atau bergerombol, tidak membentuk spora, tidak berkapsul, dan dinding selnya mengandung dua komponen utama yaitu peptidoglikan dan asam teikhoat. Metabolisme dapat dilakukan secara aerob dan anaerob. Penyusunan bakteri yang berbentuk coccus seperti Stapylococcus ini dihasilkan oleh pembian yang disebut “binary fission”, yaitu satu sel bakteri akan membeleh diri dan akan membentuk dua sel baru.
Seperti yang sudah disebutkan bahwa tujuan utama dari praktikum ini adalah mengidentifikasi bakteri Staphylococcus aureus dalam sample, sehingga sebenarnya proses perhitungan bakteri tiap pengeneran tidak terlalu diperlukan.
Proses pengenceran dilakukan sampai 10-5, dan setiap pengenceran dilakukan simplo (1 kali). Semua proses dilakukan secara asepris untuk menghindari kontaminasi dari mikroba lain. Setelah cawan berisi larutan sample dan pengencer selanjutnya ditambahkan dengan media NA hangat, kondisi yang terlalu panas akan menyebabkan bakteri yang akan diidentifikasi mati, sedangkan pada kondisi dingin media akan mengeras dan menyulitkan untuk dituangkan ke dalam cawan.
Setelah cawan berisi media, maka proses selnajutnya adalah dibiarkan sampai media mengeras, setelah media mengeras kemudian dimasukan dalam incubator dengan suhu inkubasi ± 37oC selama 48 jam (2 hari). Cawan dalam posisi terbalik (bagian atas cawan dibawah) ketika dimasukan dalam incubator.
Berdasarkan hasil praktikum dan pengamatan, saat praktikum analisa staphylucoccus aureus dengan menggunakan mikroskop tidak dapat diidentifikasi, pada lensa mikroskop tidak terlihat bentuk bakteri stapylococcus yang berdasarkan teori berbentuk seperti rantai atau anggur. Sehingga proses identifikasi tentang bakteri ini tidak dapat dilakukan secara menyeluruh. Jenis bakteri dalam media NA pun tidak dapat diketahui karena media yang dipergunakan adalah media umum untuk menumbuhkan bakteri sehingga jenis bakteri yang tumbuh pun tidak dapat diketahui.
Hal tersebut dapat disebabkan karena media yang dipergunakan bukan media spesifik staphylococcus aureus, melainkan media NA sehingga bakteri yang tumbuh kemungkinan besar adalah bakteri mesofil lain yang juga dapat tumbuh pada media yang sama, seharusnya proses identifikasi dilakukan dengan menggunakan media spesifik berdasarkan jenis bekteri yang akan diidentifikasi, sehingga hasil dari identifikasi tidak salah dan bektri yang tumbuh dapat diiperkirakan semuanya adalah bakteri yang dimaksud.
I. KESIMPULAN
Berdasarkan hasil praktikum yang telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa Staphylococcus merupakan salah satu bakteri mesofil aerob yang berbentuk coccus (bulatan). Bakteri ini dapat ditumbuhkan pada media agar, karena nutrisi utama yang dibutuhkan adalah protein. Bakteri ini tumbuh pada suhu ± 37oC sehingga diinkubasikan pada suhu yang sama, Staphylococcus aureus merupakan bakteri gram positif. Dalam pengamatan jika dialkukan di bawah mikroskop bakteri ini berbentuk bulatan-bulatan bergerombol seperti rantai atau anggur.
J. DAFTAR PUSTAKA
• Dwidjoseputro. 2005. Dasar-dasar Mikrobiologi. Jakarta : Penerbit Djambatan.
• Supardi, Imam. 1999. Mikrobiologi Dalam Pengolahan dan Keamanan Pangan. Bandung : Yayasan Adikarya Ikapi
• Jennie, Betty Sri Laksmi. 1978. Mikrobiologi Hasil Pertanian. Jakarta : Departemen Pendidikan dan Kebudayaan
• Muctadi, Deddy. 1980. Petunjuk Praktik Mikrobiolgi Hasil Pertanian. Jakarta: Departemen Pendidikan dan Kebudayaan.
ANALISA SERAT KASAR
A. ACARA
Praktikum pengujian kuantitatif kadar serat kasar dalam sample.
B. PRINSIP
Penentuan kadar serat kasar berdasarkan pada SNI 01-2891-1992, yaitu ekstraksi sample dengan asam dan basa untuk memisahkan serat kasar dari bahan lainnya.
C. TUJUAN
Untuk mengetahui kadar serat kasar dalam sample pakan 5%.
D. DASAR TEORI
Peran utama dari serat dalam makanan adalah pada kemampuannya mengikat air, selulosa dan pektin. Dengan adanya serat, membantu mempercepat sisa-sisa makanan melalui saluran pencernaan untuk disekresikan keluar. Tanpa bantuan serat, feses dengan kandungan air rendah akan lebih lama tinggal dalam saluran usus dan mengalami kesukaran melalui usus untuk dapat diekskresikan keluar karena gerakan-gerakan peristaltik usus besar menjadi lebih lamban.
Istilah dari serat makanan (dietary fiber) harus dibedakan dengan istilah serat kasar (crude fiber) yang biasa digunakan dalam analisa proksimat bahan pangan. Serat kasar adalah bagian dari pangan yang tidak dapat dihidrolisis oleh bahan-bahan kimia yang digunakan untuk menentukan kadar serat kasar yaitu asam sulfat (H2SO4 1,25%) dan natrium hidroksida (NaOH 3,25%). Sedangkan serat makanan adalah bagian dari bahan yang tidak dapat dihidrolisis oleh enzim-enzim pencernaan.
Mutu serat dapat dilihat dari komposisi komponen serat makanan, dimana komponen serat makanan terdiri dari komponen yang larut (Solube Dietary Fiber, SDF), dan komponen yang tidak larut (Insoluble Dietary Fiber, IDF).
Serat yang tidak larut dalam air ada 3 macam, yaitu selulosa, hemiselulosa dan lignin. Serat tersebut banyak terdapat pada sayuran, buah-buahan dan kacang-kacangan. Sedangkan serat yang larut dalam air adalah pectin, musilase, dan gum. Serat ini juga banyak terdapat pada buah-buahan, sayuran, dan sereal. Sedangkan gum banyak terdapat pada akasia.
Ada beberapa metode analisis serat, antara lain metode crude fiber, metode deterjen, metode enzimatis yang masing-masing mempunyai keuntungan dan kekurangan. Data serat kasar yang ditentukan secara kimia tidak menunjukan sifat serat secara fisiologis, rentang kesalahan apabila menggunakan nilai serat kasar sebagai total serat makanan adalah antara 10-500%, kesalahan terbesar terjadi pada analisis serealia dan terkecil pada kotiledon tanaman.
Metode analisis dengan menggunakan deterjen (Acid Deterjen Fiber, ADF atau Neutral Deterjen Fiber, NDF) merupakan metode gravimetri yang hanya dapat mengukur komponen serat makanan yang tidak larut. Adapun untuk mengukur komponen serat yang larut seperti pectin dan gum, harus menggunakan metode yang lain, selama analisis tersebut komponen serat larut mengalami kehilangan akibat rusak oleh adanya penggunaan asam sulfat pekat.
Metode enzimatik yang dikembangkan oleh Asp, et al (1984) merupakan metode fraksinasi enzimatik, yaitu penggunaan enzim amilase, yang diikuti oleh penggunaan enzim pepsin pankreatik. Metode ini dapat mengukur kadar serat makanan total, serat makanan larut dan serat makanan tidak larut secara terpisah.
E. ALAT DAN BAHAN
• Alat
o Neraca analitik
o Spatula
o Erlenmeyer 500 mL
o Pipet volume 50 mL
o Pendingin tegak
o Hot plate
o Corong buchner
o Kertas saring
o Pompa
o Beaker glass
o Batang pengaduk
o Oven
o Cawan petri
• Bahan
o Sample (pakan 5 %)
o n- Hexane
o H2SO4 1,25%
o NaOH 3,25%
o Etanol 96%
o Aquadest
F. PROSEDUR
• Menimbang 2-4 gram sample, bebaskan lemaknya dengan cara ekstraksi soxlet atau cara mengaduk, mengenaptuangkan sample dalam pelarut organik.
• Mengeringkan sample dan masukan ke dalam erlenmeyer 500 mL.
• Menambahkan 50 mL larutan H2SO4 1,25%, da mendidihkannya selama 30 menit dengan menggunakan pendingin tegak.
• Menambahkan 50 mL NaOH 3,25% dan mendidihkannya lagi selama 30 menit.
• Menyaring larutan dalam keadaan panas dengan menggunakan corong buchner yang berisi kertas saring tak berabu yang telah dikeringkan dan diketahui bobotnya.
• Mencuci endapan yang terdapat pada kertas saring berturut-turut dengan H2SO4 1,25% panas, air panas, dan etanol 96%.
• Mengangkat kertas saring beserta isinya, memasukannya ke dalam cawan yang telah diketahui bobotnya, mengeringkannya pada suhu 105oC dan mendinginkan dan menimbangnya sampai bobot tetap.
G. DAT A PENGAMATAN
Sample W Sample W kertas saring konstan W kertas saring + sample konstan % serat kasar
Pakan 2,0022 gram 0,8280 gram 1,5278 gram 34,95%
Perhitungan :
% serat kasar =
=
=
= 0,3495 x 100%
= 34,95 %
H. PEMBAHASAN
Sample yang dipergunakan saat praktikum adalah pakan, pengujian serat dalam sample pakan ini juga dilakukan dengan berbagai konsentrasi yang berbeda, yaitu 5%, 10% dan 15%. Dan setiap konsentrasi dilakukan 2 kali percobaan (duplo) yang dilakukan oleh kelompok yang berbeda.
Metode pengujian yang dilakukan dalam penentuan kadar serat kasar ini adalah berdasarkan pada SNI 01-2891-1992, dalam penentuan kadar serat kasar ini dibagi menjadi 3 tahapan besar yaitu deffeating, digestion, dan penyaringan.
Sample yang berhasil ditimbang adalah 2,0022 gram, setelah sample ditimbang kemudian sample memasuki tahapan deffeating, tahapan ini adalah menambahkan pelarut lemak yang bertujuan untuk menghilangkan lemak yang terkandung dalam sample, pelarut yang dipergunakan saat praktikum adalah pelarut n-Hexane.
Proses pelarutan lemak ini dilakukann dengan cara sederhana, yaitu menambahkan n-Hexane sebanyak 50 mL dalam erlenmeyer yang berisi sample dan mengaduknya sebentar, setelah itu memindahkan n-Hexane yang mengandung lemak tersebut ke dalam beaker glass, kemudian isi kembali erlenmeyer yang berisi sample tersebut dengan n-Hexane sebanyak 50 mL dan proses selanjutnya sama seperti diatas. Proses ini dilakukan sebanyak 3 kali.
Setelah itu sampel yang sudah dikurangi lemaknya tersebut kemudian ditambahkan larutan H2SO4 1,25% sebanyak 50 mL, kemudian dipanaskan diatas hot plate dengan tambahan rangkaian pendingin balik dan biarkan mendidih selama 30 menit, hal ini dilakukan untuk menghidrolisis serat makanan yang terkandung dalam sample dengan asam.
Proses deffeating dan penambahan larutan asam diatas tidak dilakukan, hal ini disebabkan proses tersebut sudah dilakukan sebelumnya sehingga saat praktikum 3 kelompok yang mengerjakan pakan dengan kadar 5%, 10%, 15% hanya meneruskan proses penambahan basa dan lainnya sampai selesai. Sedangkan 3 kelompok lain yang masing-masing mengerjakan praktikum yang sama, melakukan pengujian dari awal.
Setelah mendidih selama 30 menit, kemudian larutan dalam erlenmeyer tersebut ditambahkan dengan NaOH 3,25% sebanyak 50 mL, proses penambahan ini bertujuan hampir sama dengan tujuan penambahan H2SO4, yaitu untuk menghidrolisis serat makanan yang terkandung dalam sample dengan menggunakan basa.
Nilai serat kasar lebih rendah daripada serat makanan karena H2SO4 dan NaOH mempunyai mempunyai kemampuan lebih besar untuk menghidrolisis komponen serat makanan dibandingkan dengan enzim pencernaan. Serat makanan berkisar antara 2-3 kali serat kasar.
Setelah ditambahkan NaOH, larutan dipanaskan dengan hot plate dan rangkaian pendingin balik, dan dididihkan kembali selama 30 menit, proses pendidihan ini harus diawasi dengan baik karena saat proses pendidihan larutan berbuih, dan buih tersebut akan naik keatas, apabila dibiarkan buih tersebut akan meluap. Untuk mencegah hal itu terjadi, maka proses pemanasan ini perlu diawasi, jika buih sudah mencapai setengah dari tinggi erlenmeyer, maka angkat sedikit erlenmeyer dari permukaan hot plate dan mengocoknya sebentar untuk mencegah buih naik ke permukaan.
Setelah proses deffeating dan digestion sudah dilakukan, maka proses selanjutnya adalah penyaringan, proses ini dilakukan dengan metode penyaringan vacuum. Yaitu dengan menggunakan corong buchner dan pompa. Corong buchner yang dipergunakan sebelumnya dialasi dengan kertas saring watman no 45. Setelah kertas saring diletakan di dasar corong, kemudian semprotkan aquadest pada kertas saring tersebut, sehingga kertas saring akan menempel dengan kuat pada corong dan proses penyaringan vacuum dapat tercapai karena tidak ada udara yang masuk pada celah-celah pinggiran kertas saring tersebut, hal ini juga akan mempercepat proses penyaringan. Kandungan protein sample juga dapat mempengaruhi proses penyaringan, kandungan protein yang cukup tinggi akan mempersulit proses penyaringan, untuk itulah sebaiknya dilakukan digesti pendahuluan dengan menggunakan enzim proteolitik.
Kadar dari serat kasar diketahui berdasarkan perbandingan berat sample dan kertas saring sebelum pengeringan dengan sesudah dikeringkan (gravimetri). Karena itulah kertas saring yang dipergunakan sudah diketahui bobot konstannya. Bobot kertas saring konstan yang dipergunakan saat praktikum adalah 0,8280 gram, hasil ini merupakan hasil penimbangan terkecil dari beberapa kali penimbangan.
Proses penyaringan harus dilakukan secepat mungkin setelah proses digestion selesai dilakukan, hal ini dikarenakan penundaan yang terlalu lama akan mengakibatkan hasil analisa menjadi lebih kecil karena terjadi pengerusakan serat lebih lanjut oleh bahan kimia yang dipakai.
Penyaringan juga dilakukan saat larutan masih dalam keadaan panas, karena dalam keadaan dingin larutan mengental dan menjadi labih sulit untuk disaring, sehingga saat praktikum larutan terus dipanaskan diatas hot plate untuk menjaga suhu larutan tetap tinggi.
Setelah proses penyaringan selesai, maka selanjutnya adalah proses pembilasan. Larutan yang pertama kali digunakan untuk pembilasan adalah asam, yaitu H2SO4 1,25%, asam yang dipergunakan saat praktikum adalah ± 10 mL, asam ini dipergunakan dalam keadaan panas, suhu yang tinggi akan meningkatkan daya hidrolisis serat makanan oleh asam.
Pelarut kedua yang dipergunakan adalah aquadest, seperti halnya pada pembilasan dengan asam, pembilasan ini pun menggunakan aquadest dalam keadaan panas. Pembilasan dengan menggunakan aquadest ini bertujuan untuk melarutkan serat larut air yang masih tersisa sehingga terbawa menjadi filtrat. Pembilasan dengan aquadest dilakukan sampai filtrat sedikit bening.
Pelarut terakhir yang dipergunakan adalah etanol 96%, berbeda dengan 2 pelarut lainnya, etanol yang dipergunakan tidak dalam keadaan panas. Etanol yang dipergunakan sebanyak ±10 mL.
Setelah endapan dibilas dengan 3 pelarut tadi, kemudian endapan tersebut diangkat dan dipindahkan dalam cawan petri bersih, bobot dari cawan tidak perlu diketahui karena saat penimbangan hanya kertas saring yang berisi edapan saja yang duhitung.
Setelah kertas saring yang berisi endapan tersebut dipindakan ke dalam cawan petri, maka langkah selanjutnya adalah memasukan cawan tersebut ke dalam oven, proses pemanasan ini dilakukan dengan menggunakan suhu 105oC selama 1 jam, kemudian timbang dengan menggunakan neraca analitik, hasil dari proses pemanasan yang pertama adalah 1,6542 gram.
Proses pemanasan dengan oven, pada suhu 105oC selama 1 jam dilakukan kembali, dan sesudah itu ditimbang. Hasil penimbangan yang kedua adalah 1,6617 gram. Proses ini dilakukan berulang-ulang sampai 5 kali, berikut hasil penimbangan endapan dan kertas saring berturut-turut :
• 1,6542 gram
• 1,6617 gram
• 1,5278 gram
• 1,6377 gram
• 1,6496 gram
Karena selisih dari setiap penimbangan melebihi persyaratan yaitu 0,0020 gram, sehingga berat konstan tidak dapat diketahui secara pasti. Maka hasil penimbangan yang diambil sebagai berat konstan adalah hasil penimbangan terkecil, yaitu penimbangan yang ke 3 dengan hasil 0,5278 gram.
Berdasarkan hasil praktikum dan perhitungan, maka kadar serat kasar dalam sample pakan 5% adalah 34,95%. Persentase serat kasar dapat dipergunakan untuk mengevaluasi suatu proses penngolahan, misalnya proses penggilingan, atau proses pemisahan antara kulit dan katiledon. Akan tetapi hasil ini belum dapat dipastikan akurat, karena berat konstan yang sebenarnya masih tidak dapat diketahui, meskipun proses pengkonstanan sudah dilakukan sebanyak 5 kali.
Hal ini dapat disebabkan karena pada saat proses pengeringan dengan oven, posisi cawan pada saat pengeringan yang pertama tidak sama dengan penimbangan yang kedua dan selanjutnya, hal ini tentu berpengaruh pada hasil penimbangan karena suhu di dalam oven tidak merata, dan beberapa titik memiliki suhu yang berbeda, ada yang kurang dari 105oC, dan bahkan di beberapa titik tertentu mungkin memiliki suhu yang lebih dari 105oC.
I. KESIMPULAN
Serat kasar adalah bagian dari pangan yang tidak dapat dihidrolisis oleh bahan-bahan kimia yang digunakan untuk menentukan kadar serat kasar yaitu asam sulfat (H2SO4 1,25%) dan natrium hidroksida (NaOH 3,25%). Sedangkan serat makanan adalah bagian dari bahan yang tidak dapat dihidrolisis oleh enzim-enzim pencernaan.
Penentuan serat kasar saat praktikum berdasarkan pada metode SNI 01-2891-1992. sample yang dianalisa adalah pakan 5%. Dan berdasarkan praktikum dan hasil perhitungan, maka dapat diketahui bahwa kadar serat kasar dalam pakan 5 % adalah 34,95%. Hasil ini belum dapat dikatakan akuran, hal ini dikarenakan hasil penimbangan konstan tidak dapat diketahui. Kesalahan dalam tata letak saat proses pemanasan dengan oven dapat menjadi salah satu penyebab tidak diketahuinya bobot konstan sample dan kertas saring sebenarnya.
J. DAFTAR PUSTAKA
• Sudarmadji, Slamet. et al. 1996. Prosedur Analisis Bahan Makanan dan Pertanian.Yogyakarta: Penerbit Liberty.
• Sudarmadji, Slamet. et al. 1996. Analisis Bahan Makanan dan Pertanian.Yogyakarta: Penerbit Liberty.
• http://www.wikipedia.org
Praktikum pengujian kuantitatif kadar serat kasar dalam sample.
B. PRINSIP
Penentuan kadar serat kasar berdasarkan pada SNI 01-2891-1992, yaitu ekstraksi sample dengan asam dan basa untuk memisahkan serat kasar dari bahan lainnya.
C. TUJUAN
Untuk mengetahui kadar serat kasar dalam sample pakan 5%.
D. DASAR TEORI
Peran utama dari serat dalam makanan adalah pada kemampuannya mengikat air, selulosa dan pektin. Dengan adanya serat, membantu mempercepat sisa-sisa makanan melalui saluran pencernaan untuk disekresikan keluar. Tanpa bantuan serat, feses dengan kandungan air rendah akan lebih lama tinggal dalam saluran usus dan mengalami kesukaran melalui usus untuk dapat diekskresikan keluar karena gerakan-gerakan peristaltik usus besar menjadi lebih lamban.
Istilah dari serat makanan (dietary fiber) harus dibedakan dengan istilah serat kasar (crude fiber) yang biasa digunakan dalam analisa proksimat bahan pangan. Serat kasar adalah bagian dari pangan yang tidak dapat dihidrolisis oleh bahan-bahan kimia yang digunakan untuk menentukan kadar serat kasar yaitu asam sulfat (H2SO4 1,25%) dan natrium hidroksida (NaOH 3,25%). Sedangkan serat makanan adalah bagian dari bahan yang tidak dapat dihidrolisis oleh enzim-enzim pencernaan.
Mutu serat dapat dilihat dari komposisi komponen serat makanan, dimana komponen serat makanan terdiri dari komponen yang larut (Solube Dietary Fiber, SDF), dan komponen yang tidak larut (Insoluble Dietary Fiber, IDF).
Serat yang tidak larut dalam air ada 3 macam, yaitu selulosa, hemiselulosa dan lignin. Serat tersebut banyak terdapat pada sayuran, buah-buahan dan kacang-kacangan. Sedangkan serat yang larut dalam air adalah pectin, musilase, dan gum. Serat ini juga banyak terdapat pada buah-buahan, sayuran, dan sereal. Sedangkan gum banyak terdapat pada akasia.
Ada beberapa metode analisis serat, antara lain metode crude fiber, metode deterjen, metode enzimatis yang masing-masing mempunyai keuntungan dan kekurangan. Data serat kasar yang ditentukan secara kimia tidak menunjukan sifat serat secara fisiologis, rentang kesalahan apabila menggunakan nilai serat kasar sebagai total serat makanan adalah antara 10-500%, kesalahan terbesar terjadi pada analisis serealia dan terkecil pada kotiledon tanaman.
Metode analisis dengan menggunakan deterjen (Acid Deterjen Fiber, ADF atau Neutral Deterjen Fiber, NDF) merupakan metode gravimetri yang hanya dapat mengukur komponen serat makanan yang tidak larut. Adapun untuk mengukur komponen serat yang larut seperti pectin dan gum, harus menggunakan metode yang lain, selama analisis tersebut komponen serat larut mengalami kehilangan akibat rusak oleh adanya penggunaan asam sulfat pekat.
Metode enzimatik yang dikembangkan oleh Asp, et al (1984) merupakan metode fraksinasi enzimatik, yaitu penggunaan enzim amilase, yang diikuti oleh penggunaan enzim pepsin pankreatik. Metode ini dapat mengukur kadar serat makanan total, serat makanan larut dan serat makanan tidak larut secara terpisah.
E. ALAT DAN BAHAN
• Alat
o Neraca analitik
o Spatula
o Erlenmeyer 500 mL
o Pipet volume 50 mL
o Pendingin tegak
o Hot plate
o Corong buchner
o Kertas saring
o Pompa
o Beaker glass
o Batang pengaduk
o Oven
o Cawan petri
• Bahan
o Sample (pakan 5 %)
o n- Hexane
o H2SO4 1,25%
o NaOH 3,25%
o Etanol 96%
o Aquadest
F. PROSEDUR
• Menimbang 2-4 gram sample, bebaskan lemaknya dengan cara ekstraksi soxlet atau cara mengaduk, mengenaptuangkan sample dalam pelarut organik.
• Mengeringkan sample dan masukan ke dalam erlenmeyer 500 mL.
• Menambahkan 50 mL larutan H2SO4 1,25%, da mendidihkannya selama 30 menit dengan menggunakan pendingin tegak.
• Menambahkan 50 mL NaOH 3,25% dan mendidihkannya lagi selama 30 menit.
• Menyaring larutan dalam keadaan panas dengan menggunakan corong buchner yang berisi kertas saring tak berabu yang telah dikeringkan dan diketahui bobotnya.
• Mencuci endapan yang terdapat pada kertas saring berturut-turut dengan H2SO4 1,25% panas, air panas, dan etanol 96%.
• Mengangkat kertas saring beserta isinya, memasukannya ke dalam cawan yang telah diketahui bobotnya, mengeringkannya pada suhu 105oC dan mendinginkan dan menimbangnya sampai bobot tetap.
G. DAT A PENGAMATAN
Sample W Sample W kertas saring konstan W kertas saring + sample konstan % serat kasar
Pakan 2,0022 gram 0,8280 gram 1,5278 gram 34,95%
Perhitungan :
% serat kasar =
=
=
= 0,3495 x 100%
= 34,95 %
H. PEMBAHASAN
Sample yang dipergunakan saat praktikum adalah pakan, pengujian serat dalam sample pakan ini juga dilakukan dengan berbagai konsentrasi yang berbeda, yaitu 5%, 10% dan 15%. Dan setiap konsentrasi dilakukan 2 kali percobaan (duplo) yang dilakukan oleh kelompok yang berbeda.
Metode pengujian yang dilakukan dalam penentuan kadar serat kasar ini adalah berdasarkan pada SNI 01-2891-1992, dalam penentuan kadar serat kasar ini dibagi menjadi 3 tahapan besar yaitu deffeating, digestion, dan penyaringan.
Sample yang berhasil ditimbang adalah 2,0022 gram, setelah sample ditimbang kemudian sample memasuki tahapan deffeating, tahapan ini adalah menambahkan pelarut lemak yang bertujuan untuk menghilangkan lemak yang terkandung dalam sample, pelarut yang dipergunakan saat praktikum adalah pelarut n-Hexane.
Proses pelarutan lemak ini dilakukann dengan cara sederhana, yaitu menambahkan n-Hexane sebanyak 50 mL dalam erlenmeyer yang berisi sample dan mengaduknya sebentar, setelah itu memindahkan n-Hexane yang mengandung lemak tersebut ke dalam beaker glass, kemudian isi kembali erlenmeyer yang berisi sample tersebut dengan n-Hexane sebanyak 50 mL dan proses selanjutnya sama seperti diatas. Proses ini dilakukan sebanyak 3 kali.
Setelah itu sampel yang sudah dikurangi lemaknya tersebut kemudian ditambahkan larutan H2SO4 1,25% sebanyak 50 mL, kemudian dipanaskan diatas hot plate dengan tambahan rangkaian pendingin balik dan biarkan mendidih selama 30 menit, hal ini dilakukan untuk menghidrolisis serat makanan yang terkandung dalam sample dengan asam.
Proses deffeating dan penambahan larutan asam diatas tidak dilakukan, hal ini disebabkan proses tersebut sudah dilakukan sebelumnya sehingga saat praktikum 3 kelompok yang mengerjakan pakan dengan kadar 5%, 10%, 15% hanya meneruskan proses penambahan basa dan lainnya sampai selesai. Sedangkan 3 kelompok lain yang masing-masing mengerjakan praktikum yang sama, melakukan pengujian dari awal.
Setelah mendidih selama 30 menit, kemudian larutan dalam erlenmeyer tersebut ditambahkan dengan NaOH 3,25% sebanyak 50 mL, proses penambahan ini bertujuan hampir sama dengan tujuan penambahan H2SO4, yaitu untuk menghidrolisis serat makanan yang terkandung dalam sample dengan menggunakan basa.
Nilai serat kasar lebih rendah daripada serat makanan karena H2SO4 dan NaOH mempunyai mempunyai kemampuan lebih besar untuk menghidrolisis komponen serat makanan dibandingkan dengan enzim pencernaan. Serat makanan berkisar antara 2-3 kali serat kasar.
Setelah ditambahkan NaOH, larutan dipanaskan dengan hot plate dan rangkaian pendingin balik, dan dididihkan kembali selama 30 menit, proses pendidihan ini harus diawasi dengan baik karena saat proses pendidihan larutan berbuih, dan buih tersebut akan naik keatas, apabila dibiarkan buih tersebut akan meluap. Untuk mencegah hal itu terjadi, maka proses pemanasan ini perlu diawasi, jika buih sudah mencapai setengah dari tinggi erlenmeyer, maka angkat sedikit erlenmeyer dari permukaan hot plate dan mengocoknya sebentar untuk mencegah buih naik ke permukaan.
Setelah proses deffeating dan digestion sudah dilakukan, maka proses selanjutnya adalah penyaringan, proses ini dilakukan dengan metode penyaringan vacuum. Yaitu dengan menggunakan corong buchner dan pompa. Corong buchner yang dipergunakan sebelumnya dialasi dengan kertas saring watman no 45. Setelah kertas saring diletakan di dasar corong, kemudian semprotkan aquadest pada kertas saring tersebut, sehingga kertas saring akan menempel dengan kuat pada corong dan proses penyaringan vacuum dapat tercapai karena tidak ada udara yang masuk pada celah-celah pinggiran kertas saring tersebut, hal ini juga akan mempercepat proses penyaringan. Kandungan protein sample juga dapat mempengaruhi proses penyaringan, kandungan protein yang cukup tinggi akan mempersulit proses penyaringan, untuk itulah sebaiknya dilakukan digesti pendahuluan dengan menggunakan enzim proteolitik.
Kadar dari serat kasar diketahui berdasarkan perbandingan berat sample dan kertas saring sebelum pengeringan dengan sesudah dikeringkan (gravimetri). Karena itulah kertas saring yang dipergunakan sudah diketahui bobot konstannya. Bobot kertas saring konstan yang dipergunakan saat praktikum adalah 0,8280 gram, hasil ini merupakan hasil penimbangan terkecil dari beberapa kali penimbangan.
Proses penyaringan harus dilakukan secepat mungkin setelah proses digestion selesai dilakukan, hal ini dikarenakan penundaan yang terlalu lama akan mengakibatkan hasil analisa menjadi lebih kecil karena terjadi pengerusakan serat lebih lanjut oleh bahan kimia yang dipakai.
Penyaringan juga dilakukan saat larutan masih dalam keadaan panas, karena dalam keadaan dingin larutan mengental dan menjadi labih sulit untuk disaring, sehingga saat praktikum larutan terus dipanaskan diatas hot plate untuk menjaga suhu larutan tetap tinggi.
Setelah proses penyaringan selesai, maka selanjutnya adalah proses pembilasan. Larutan yang pertama kali digunakan untuk pembilasan adalah asam, yaitu H2SO4 1,25%, asam yang dipergunakan saat praktikum adalah ± 10 mL, asam ini dipergunakan dalam keadaan panas, suhu yang tinggi akan meningkatkan daya hidrolisis serat makanan oleh asam.
Pelarut kedua yang dipergunakan adalah aquadest, seperti halnya pada pembilasan dengan asam, pembilasan ini pun menggunakan aquadest dalam keadaan panas. Pembilasan dengan menggunakan aquadest ini bertujuan untuk melarutkan serat larut air yang masih tersisa sehingga terbawa menjadi filtrat. Pembilasan dengan aquadest dilakukan sampai filtrat sedikit bening.
Pelarut terakhir yang dipergunakan adalah etanol 96%, berbeda dengan 2 pelarut lainnya, etanol yang dipergunakan tidak dalam keadaan panas. Etanol yang dipergunakan sebanyak ±10 mL.
Setelah endapan dibilas dengan 3 pelarut tadi, kemudian endapan tersebut diangkat dan dipindahkan dalam cawan petri bersih, bobot dari cawan tidak perlu diketahui karena saat penimbangan hanya kertas saring yang berisi edapan saja yang duhitung.
Setelah kertas saring yang berisi endapan tersebut dipindakan ke dalam cawan petri, maka langkah selanjutnya adalah memasukan cawan tersebut ke dalam oven, proses pemanasan ini dilakukan dengan menggunakan suhu 105oC selama 1 jam, kemudian timbang dengan menggunakan neraca analitik, hasil dari proses pemanasan yang pertama adalah 1,6542 gram.
Proses pemanasan dengan oven, pada suhu 105oC selama 1 jam dilakukan kembali, dan sesudah itu ditimbang. Hasil penimbangan yang kedua adalah 1,6617 gram. Proses ini dilakukan berulang-ulang sampai 5 kali, berikut hasil penimbangan endapan dan kertas saring berturut-turut :
• 1,6542 gram
• 1,6617 gram
• 1,5278 gram
• 1,6377 gram
• 1,6496 gram
Karena selisih dari setiap penimbangan melebihi persyaratan yaitu 0,0020 gram, sehingga berat konstan tidak dapat diketahui secara pasti. Maka hasil penimbangan yang diambil sebagai berat konstan adalah hasil penimbangan terkecil, yaitu penimbangan yang ke 3 dengan hasil 0,5278 gram.
Berdasarkan hasil praktikum dan perhitungan, maka kadar serat kasar dalam sample pakan 5% adalah 34,95%. Persentase serat kasar dapat dipergunakan untuk mengevaluasi suatu proses penngolahan, misalnya proses penggilingan, atau proses pemisahan antara kulit dan katiledon. Akan tetapi hasil ini belum dapat dipastikan akurat, karena berat konstan yang sebenarnya masih tidak dapat diketahui, meskipun proses pengkonstanan sudah dilakukan sebanyak 5 kali.
Hal ini dapat disebabkan karena pada saat proses pengeringan dengan oven, posisi cawan pada saat pengeringan yang pertama tidak sama dengan penimbangan yang kedua dan selanjutnya, hal ini tentu berpengaruh pada hasil penimbangan karena suhu di dalam oven tidak merata, dan beberapa titik memiliki suhu yang berbeda, ada yang kurang dari 105oC, dan bahkan di beberapa titik tertentu mungkin memiliki suhu yang lebih dari 105oC.
I. KESIMPULAN
Serat kasar adalah bagian dari pangan yang tidak dapat dihidrolisis oleh bahan-bahan kimia yang digunakan untuk menentukan kadar serat kasar yaitu asam sulfat (H2SO4 1,25%) dan natrium hidroksida (NaOH 3,25%). Sedangkan serat makanan adalah bagian dari bahan yang tidak dapat dihidrolisis oleh enzim-enzim pencernaan.
Penentuan serat kasar saat praktikum berdasarkan pada metode SNI 01-2891-1992. sample yang dianalisa adalah pakan 5%. Dan berdasarkan praktikum dan hasil perhitungan, maka dapat diketahui bahwa kadar serat kasar dalam pakan 5 % adalah 34,95%. Hasil ini belum dapat dikatakan akuran, hal ini dikarenakan hasil penimbangan konstan tidak dapat diketahui. Kesalahan dalam tata letak saat proses pemanasan dengan oven dapat menjadi salah satu penyebab tidak diketahuinya bobot konstan sample dan kertas saring sebenarnya.
J. DAFTAR PUSTAKA
• Sudarmadji, Slamet. et al. 1996. Prosedur Analisis Bahan Makanan dan Pertanian.Yogyakarta: Penerbit Liberty.
• Sudarmadji, Slamet. et al. 1996. Analisis Bahan Makanan dan Pertanian.Yogyakarta: Penerbit Liberty.
• http://www.wikipedia.org
ANALISA LEMAK METODE WEIBULL
A. ACARA
Praktikum penentuan Analisis Lemak dengan menggunakan metode Weibull, penentuan Angka Penyabunan, dan penentuan Asam Lemak Bebas (FFA).
B. PRINSIP
1. Analisis Kadar Lemak dengan Metode Weibull
Ekstraksi lemak dengan pelarut non polar setelah contoh dihidrolisis dalam suasana asam untuk membebaskan lemak yang terikat.
2. Penentuan Angka Penyabunan
Titrasi kelebihan KOH oleh HCl yang ditetapkan sebagai banyaknya KOH saat titik akhir.
3. Penentuan Asam Lemak Bebas (FFA)
Penentuan presentase asam lemak bebas (FFA) berprinsip pada titrasi sampel yang dilarutkan dengan alkohol netral oleh NaOH untuk menetralkan asam lemak bebas.
C. TUJUAN
1. Analisis Lemak dengan metode Weibull
Melakukan penetapan kadar lemak atau minyak dalam bahan hasil pertanian atau hasil olahanya yang dinyatakan sebagai lemak atau minyak yang terekstraksi.
2. Penentuan Angka Penyabunan
Melakukan penetapan bilangan penyabunan yang dinyatakan sebagai jumlah mg. KOH yang dibutuhkan untuk menyabunkan lemak atau minyak secara sempurna dari 1 g sample.
3. Penentuan Asam Lemak Bebas (FFA)
Melakukan penetapan asam lemak bebas dari sample sebagai persentase bobot dari asam lemak bebas yang ada.
D. REAKSI
REAKSI
E. DASAR TEORI
Lemak atau minyak adalah senyawa makromolekul berupa trigliserida, yaitu sebuah ester yang tersusun dari asam lemak dan gliserol. Jenis dan jumlah asam lemak penyusun suatu minyak atau lemak menentukan karakteristik fisik dan kimiawi minyak atau lemak.
Disebut minyak apabila trigliserida tersebut berbentuk cair pada suhu kamar dan disebut lemak apabila berbentuk padat pada suhu kamar. Asam lemak berdasarkan sifat ikatan kimianya dibedakan menjadi 2 yaitu :
1. asam lemak jenuh
2. asam lemak tidak jenuh
Sebagai zat gizi, lemak atau minyak semakin baik kualitasnya jika banyak mengandung asam lemak tidak jenuh dan sebaliknya. Minyak atau lemak bersifat non polar sehingga tidak larut dalam pelarut polar seperti air dan larutan asam, tetapi larut dalam pelarut organik yang bersifat non polar seperti n-Hexane, Benzene, Chloroform, dll.
Pemilihan bahan pelarut yang paling sesuai untuk ekstraksi lipida adalah dengan menentukan derajat polaritasnya. Pada dasarnya semua bahan akan mudah larut dalam pelarut yang sama polaritasnya. Karena polaritas lipida berbeda-beda maka tidak ada bahan pelarut umum (universal) untuk semua acam lipida.
Contoh di bawah ini menunjukan beberapa bahan jenis pelarut yang sesuai dengan ekstraksi lipida tertentu :
senyawa trigliserida yang bersifat non polar akan mudah diekstraksi dengan pelarut-pelarut non polar misalnya n-Hexane atau petroleum ether
glikolipida yang polar akan mudah diekstraksi dengan alkohol yang polar
lesitin (lecithin) atau secara kimiawi adalah senyawa phosphatidyl-choline bersifat basis dan akan mudah larut dalam pelarut yang sedikit asam misalnya alkohol.
Phosphatidyl-serine yaitu fosfolipida yang bersifat polar dan asam akan mudah larut dalam khloroform yang sedikit polar dan basis.
Senyawa lemak dan minyak merupakan senyawa alami penting yang dapat dipelajari secara lebih mendalam relatif lebih mudah daripada senyawa-senyawa makronutrien yang lain.
Prosedur-prosedur analisa lemka dan minyak berkembang pesat, baik yang menggunakan alat peralatan sederhana maupun yang lebih mutakhir. Kemudahan analisa tersebut dimungkinkan antara lain :
1. molekul lemak dan minyak relatif lebih kecil dan kurang kompleks dibandingkan dengan molekul karbohidrat dan protein.
2. molekul-molekul lemak dan minyak dapat disintesakan di laboratorium menurut kebutuhan, sedangkan molekul protein dan karbohidrat yang kompleks, misalnya lignin belum dapat.
Analisa lemak dan minyak yang umum dilakukan pada bahan makanan dapat digolongkan dalam 3 kelompok tujuan ini :
1. penentuan kuntitatif atau penentuan kadar lemak atau minyak yang terdapat pada bahan pertanian dan olahanya.
2. penentuan kualitas minyak (murni) sebagai bahan makanan yang berkaitan dengan proses ekstraksinya, atau ada tidaknya perlakuan pemurnian lanjutan, misalnya :
penjernihan (refining)
penghilangan bau (deodorizing)
penghilangan warna (bleaching), dll
penentuan tingkat kemurnian minyak ini sangat berhubungan erat dengan kekuatan daya simpannya, sifat gorengnya, bau maupun rasanya.
Tolak ukur kualitasnya ini termasuk angka asam lemak bebas (Free Fatty Acid atau FFA), bilangan peroksida, tingkat ketengikan, dan kadar air.
3. Penentuan sifat fisis maupun kimiawi yang khas atau mencirikan sifat minyak tertentu. Data mengenai sifat minyak ini misalnya :
angka iodin yang menentukan tingkat ketidakjenuhan asam-asam penyusunnya
titik cair (melting point)
angka Reichert-meissel yaitu angka yang menujukan jumlah asam-asam lemak yang dapat larut dalam air dan mudah menguap (panjang rantai C4-C6)
angka Polenske yaitu angka yang menunjukan kadar asam-asam lemak yang mudah menguap tetapi tidak larut dalam air (C8-C14)
angka Kirschner) yang khusus menunjukan jumlah asam butirat
Sedangkan angka penyabunan (Saponification value) menunjukkan secara relatif besar kecilnya molekul asam-asam lemak yang terkandung dalam gliserida. Titik tolak ukur lain misalnya angka indeks refraksi , titik cair, angka kekentalan, titik percik (Flash point), komposisi asam-asam lemak, dll.
Penentuan kadar lemak dengan pelarut, selain lemak juga terikut fosfolipida, sterol, asam lemak bebas, karotenoid dan pigmen yang lain. Karena itu hasil analisanya disebut lemak kasar (crude fat)
Ada 2 cara penentuan kadar lemak berdasarkan jenis bahan yang akan ditentukan :
1. Bahan Kering
Untuk penentuan lemak dari bahan kering, bahan dibungkus atau ditempatkan dalam thimble lalu dikeringkan dalam oven unutk menghilangkan kadar airnya. Ekstraksi lemak dari bahan kering dapat dilakukan secara terputus-putus atau secara berkesinambungan. Ekstraksi secara terputus-putus dilakukan dengan alat soxhlet atau alat ekstraksi ASTM (American Society Testing Material). Sedangkan secara berkesinambungan dengan alat Goldfisch atau ASTM yang telah dimodifikasi.
2. Bahan Basah
Penentuan kadar lemak dari bahan cair dapat menggunakan botol Babcock atau dengan Mojonnier. Sample yang telah ditimbang dimasukan ke dalam botol Babcock setelah melalui beberapa tahap dan disentrifuse lemak akan semakin terpisah dengan cairannya, dan agar dapat dibaca banyaknya lemak maka ke dalam botol ditambahkan aquadest panas sampai lemak tepat pada skala yang terdapat pada leher botol Babcock, dengan demikian banyaknya lemak dapat langsung diketahui.
Sedangkan dengan metode Mojonnier, hasil ekstraksi kemudian diuapkan pelarutnya dan dikeringkan dalam oven sampai diperoleh berat konstan, berat residu dinyatakan sebagai berat lemak atau minyak dalam bahan.
F. ALAT DAN BAHAN
Alat
1. Analisis Kadar lemak Metode Wiebull
• Labu lemak
• Soxhlet
• Hot Plate
• Oven
• Neraca analitik
• Beaker glass
• Corong saring
• Kaca arloji
• Erlenmeyer
• Spatula
• Kertas saring
• Pipet ukur 50 mL
• Pipet tetes
• Bulp
2. Penentuan Angka Penyabunan
• Neraca analitik
• Erlenmeyer 200 mL
• Pipet ukur 50 mL
• Labu ukur
• Pendingin balik (Kompresor)
• Hot plate
• Pipet tetes
• Buret 50 mL
• Spatula
• Batang pengaduk
• Botol semprot
• Beaker glass
• Bulp
3. Penentuan Asam Lemak Bebas (FFA)
• Beaker glass
• Batang pengaduk
• Buret
• Botol semprot
• Hot plate
• Neraca analitik
• Erlenmeyer
• Pipet ukur 50 mL
• Pipet tetes
• Bulp
• Buret 50 mL
Bahan
1. Analisis Kadar Lemak Metode Weibull
• Asam klorida (HCl) 25 %
• n-Hexane
• Aquadest
• Sample tepung pisang
2. Penentuan Angka Penyabunan
• Larutan KOH
• Indikator Phenolphtalein
• Larutan asam klorida (HCl) 0,5 N
• Sample margarine (Blue Band)
3. Penentuan Asam Lemak Bebas (FFA)
• Alkohol netral
• Indikator Phenolphtalein
• Natrium Hidroksida (NaOH) 0,1 N
• Sample Margarine (Blue Band)
G. PROSEDUR
1. Analisis Kadar Lemak Metode Weibull
• Menimbang dengan seksama 1-2 gram contoh ke dalam gelas piala
• Menambahkan HCl 25 % sebanyak 30 mL dan air sebanyak 20 mL, serta beberapa batu didih
• Menutup gelas piala dengan kaca arloji dan didihkan selama 15 menit
• Kemudian menyaringnya dalam keadaan panas dan mencucinya dengan air panas hingga tidak bereaksi asam lagi
• Mengeringkan kertas saring berikut isinya pada suhu 100oC-105oC
• Memasukan ke dalam selongsong keras yang dialasi kapas
• Menyumbat selongsong kertas berisi contoh tersebut dengan kapas
• Memasukan selongsong kertas tersebut ke dalam alat soxhlet yang dihubungkan dengan labu lemak yang telah dikeringkan dan diketahui bobotnya
• Mengekstrak dengan n-Hexane atau pelarut lemak lainnya selama kurang lebih 2-3 jam
• Menyuling n-Hexane dan mengeringkan akstrak lemak dalam oven pengering pada suhu 105oC
• Mendinginkan dalam eksikator dan menimbangnya
• Mengulangi proses pengkonstanan sehingga berat labu konstan
3. Penentuan Angka Penyabunan
• Menimbang contoh dengan teliti antara 1,5-5,0 gram dalam erlenmeyer 200 mL
• Menambah larutan KOH sebanyak 50 mL, yang dibuat dari 40 gram KOH dalam 1 liter akohol
• Menutupnya dengan pendingin balik (kompresor)
• Mendidihkan dengan hati-hati selama 30 menit
• Kemudian didinginkan
• Menambahkan beberapa tetes indikator phenolphtalein (PP)
• Mentitrasi kelebihan larutan KOH dengan larutan standar HCl 0,5 N
• Melakukan titrasi blanko untuk mengetahui kelebihan larutan KOH
3. Penentuan Asam Lemak Bebas (FFA)
• Mengaduk bahan secara merata dan berada dalam keadaan cair pada saat mengambil contohnya
• Menimbang sebanyak 28,2 ± 0,2 gram contoh dalam erlenmeyer
• Menambahkan alkohol netral panas sebanyak 50 mL dan indikator phenolphtalein (PP) sebanyak 2 mL
• Mentitrasi dengan larutan NaOH 0,1 N yang telah distandardisasi sampai warna merah jambu tercapai dan tidak hilang selama 30 detik
• Persen asam lemak bebas dinyatakan sebagai oleat pada kebanyakan minyak dan lemak. Untuk minyak kelapa dan minyak inti kelapa sawit dinyatakan sebagai laurat, sedang pada minyak kelapa sawit dinyatakan sebagai palmitat.
H. DATA PENGAMATAN
1. Analisis Kadar Lemak Metode Weibull
NO Wo Ws Wi % LEMAK Rata-rata
1 84,0050 g 1,8692 g 84,0165 g 0,6152 % -
Kadar lemak
= 0,5885 %
2. Angka Penyabunan
Berat Sampel = 1,5916 gr
NaOH = 9,2 Ml
3. Penentuan Bilangan Asam Lemak Bebas
NO Berat Sample (g) Volume NaOH (mL) Konsentrasi NaOH (N) % FFA
1 28,2919 4,4 0,093 0,37026
2 5,0248 0,2 0,093 0,0947
Sampel I =
=
= 0,37026 %
Sampel II =
=
= 0,09476 %
I. PEMBAHASAN
1. Analisa Kadar Lemak Metode Weibull
Dalam analisa kadar lemak dengan metode weibull ini sample yang dipergunakan adalah tepung pisang, berdasarkan SNI (Standar Nasional Indonesia) berat sample yang dipergunakan untuk analisa kadar lemak adalah sebanyak 1-2 gram, dan saat praktikum sample yang dipergunakan sebanyak 1,8692 gram.
Setelah sample ditimbang, kemudian ditambahkan HCl 25 %, penambahan HCl ini dimaksudkan untuk mendapatkan suasana asam sehingga membantu melepaskan atau membebaskan lemak yang terkandung dalam sample.
Sebelum dipanaskan, sample, HCl dan Aquadest dalam beaker glass ditambahkan batu didih yang berfungsi untuk meredam bumping atau letupan yang mungkin terjadi selama proses pemanasan.
Proses pemanasan dilakukan sampai mendidih selama 15 menit, selama proses pemanasan beaker glass ditutup dengan menggunakan pertridisk, hal ini dilakukan untuk mencegah menyebarnya uap asam yang ditimbulkan dari hasil pemanasan, sehingga selama proses ini dilakukan di tempat yang mempunyai kondisi ventilasi yang baik atau di dekat jendela.
Setelah mendidih, sample kemudian disaring dalam keadaan panas, saat proses penyaringan kelengkapan K3 harus diperhatikan, hal ini dikarenakan uap yang timbul saat penyaringan dapat mengganggu dan berbahaya. Penyaringan dilakukan dengan menggunakan corong gelas yang dilengkapi dengan kertas saring watman, ukuran dari kertas saring yang dipergunakan disesusaikan dengan ukuran corong yang dipergunakan, tinggi dari kertas saring minimal sejajar dengan corong, hal ini dimaksudkan untuk menghindari meresapnya lemak pada dinding corong akibat gaya kapilaritas. Apabila hal ini tidak diperhatikan maka akan mempengaruhi perhitungan kadar lemak yang terkandung pada bahan, dan pengujian menjadi tidak akurat.
Setelah semua bahan disaring, maka endapan yang tersaring dalam kertas saring dibilas dengan menggunakan air panas, proses pembilasan dengan air panas dilakukan untuk membantu melarutkan HCl yang masih terkandung dalam endapan, air dipergunakan untuk membilas endapan karena air bersifat polar dan tidak akan melarutkan lemak atau minyak yang terkandung dalam bahan (karena lemak atau minyak hanya akan larut oleh pelarut non polar) sehingga pembilasan dengan air panas tidak akan berpengaruh pada hasil pengujian.
Pembilasan dengan air ini dilakukan sampai endapan tidak bersifat asam, untuk mengetahui apakah larutan sudah tidak bersifat asam atau tidak, maka perlu dilakukan tes kualitatif, tes kualitatif yang dilakukan adalah dengan menggunakan kertas lakmus biru, apabila kertas lakmus berubah menjadi warna merah muda (pink) maka itu berarti endapan masih mengandung asam, apabila lakmus sudah tidak berubah warna, maka itu berarti endapan sudah tidak bersifat asam dan proses selanjutnya dapat dilakukan.
Proses selanjutnya adalah mengeringkan kertas saring tersebut dalam oven dengan suhu kira-kira 100o-105oC, proses pengeringan dilakukan sampai kertas saring cukup kering, tujuan dari proses pengeringan adalah menguapkan sebagian besar sisa air yang terkandung dalam endapan. Proses pengeringan ini sebaiknya tidak dilakukan terlalu lama, proses pengeringan yang terlalu lama akan mengakibatkan lemak yang terkandung menjadi sulit untuk diekstraksi.
Setelah endapan kering, proses selanjutnya dengan membungkus sample dengan kertas saring yang dibentuk menyerupai selongsong dan kedua ujungnya disumbat dengan kapas bebas lemak, selongsong atau thimbel ini kemudian dimasukan ke dalam alat ekstraksi soxhlet.
Ukuran dari thimbel ini disesuaikan dengan ukuran dari soxhlet yang dipergunakan. Setelah thimbel dimasukan, kemudian pelarut non polar dimasukan ke dalam soxhlet dengan menggunakan pipet ukur, pelarut non polar yang dipergunakan adalah n-Hexane, banyaknya pelarut yang dipergunakan juga disesuaikan dengan soxhlet yang dipergunakan, takarannya adalah 1,5 kali tinggi soxhlet. Pertama-tama adalah mengisi soxhlet sampai penuh dan biarkan mengalir ke bagian labu lemak, kemudian tambahkan lagi sampai setengah bagian soxhlet.
Urutan dari rangkaian peralatan uji kadar lemak ini adalah pada bagian paling bawah hot plate, labu lemak, soxhlet, dan bagian yang paling atas adalah kondensor. Dengan rangkaian yang seperti ini maka ekstraksi dilakukan secara berkesinambungan (Continue). Labu lemak yang dipergunakan adalah labu lemak yang sudah diketahui beratnya secara konstan. Pada saat praktikum labu lemak yang dipergunakan mempunyai berat konstan 84,0050 gram (Wo).
Proses ekstraksi dilakukan minimal 6 kali, dihitung dari berapa kali thimbel dalam soxhlet terbenam oleh pelarut non polar tersebut. Selama proses ekstraksi berlangsung warna pelarut n-Hexane berubah, dari bening menjadi sedikit kekuningan, hal ini disebabkan karena kandungan lemak dalam sample terekstraksi dan merubah warna larutan menjadi agak kekuningan.
Setelah proses ekstraksi selesai dan diperkirakan lemak dalam sample sudah terekstraksi semua, maka proses selanjutnya adalah mengambil pelarut non polar yang dipergunakan dan dimasukan kembali ke dalam wadahnya. Proses pengambilan dilakukan saat ekstraksi masih berlangsung dan hot plate dalam keadaan hidup, pengambilan pelarut dilakukan dengan menggunakan pipet ukur dan pelarut diambil sebelum mengalir ke labu ukur, dengan kata lain masih berada dalam bagian soxhlet, sehingga sambungan antara soxhlet dan pendingin balik atau kondensor dilepaskan dan pipet ukur dimasukan ke dalam bagian soxhlet tersebut.
Karena n-hexane mempunyai titik didih yang lebih rendah dari lemak, maka selama hot plate dinyalakan n-hexane akan menguap dan masuk ke dalam alat pendingin balik atau kondensor, uap pelarut akan mengembun karena uap tersebut didinginkan, tetesan pelarut akan kembali turun ke alat ekstraktor soxhlet dan merendam thimbel yang berisi sample dan lemak yang terkandung dalam sample akan larut oleh pelarut non polar tersebut. Saat soxlet terisi penuh, pelarut dan lemak hasil ekstraksinya akan mengalir ke bagian labu lemak yang dipanaskan dan akan menguapkan pelarut, sehingga yang tersisa hanya lemak yang terekstraksi karena pelarut mempunyai titik didih yang lebih rendah.
Sehingga apabila pelarut diambil dari bagian soxhlet, maka proses diatas akan terputus dan menyebabkan proses ekstraksi terhenti menyisakan lemak yang terdapat dalam labu lemak. Hasil ekstraksi inilah yang dinyatakan sebagai kandungan lemak yang terdapat dalam sample.
Setelah proses ekstraksi selesai, maka lebu lemak yang terdapat pada bagian bawah dipisahkan dari rangkaian kemudian dikeringkan di dalam oven dengan suhu 105oC sampai kira-kira kertas saring kering, proses pengeringan dilakukan untuk menguapkan pelarut yang masih terkandung dalam labu lemak yang dapat mempengaruhi berat sample, karena proses selanjutnya adalah penimbangan.
Berdasarkan data praktikum dapat diketahui berat labu ukur dan lemak hasil ekstraksi (Wi) adalah 84,0165 gram. Dan berdasarkan perhitungan maka lemak yang terkandung dalam sample adalah 0,6152 %.
2. Penentuan Angka Penyabunan
Berbeda dengan penentuan kadar lemak, sample yang dipergunakan untuk penentuan angka penyabunan adalah margarine dengan merk dagang Blue Band. Penentuan bilangan penyabunan ini dapat dipergunakan untuk mengetahui sifat minyak dan lemak. Pengujian sifat ini dipergunakan untuk membedakan lemak yang satu dengan yang lainnya.
Selain untuk mengetahui sifat fisik lemak atau minyak, angka penyabunan juga dapat dipergunakan untuk menentukan berat molekul minyak dan lemak secara kasar.
Apabila sample yang akan diuji disabunkan dengan larutan KOH berlebih dalam alkohol, maka KOH akan bereaksi dengan trigliserida, yaitu tiga molekul KOH bereaksi dengan satu molekul minyak atau lemak. Larutan alkali yang tertinggal tersebut kemudian ditentukan dengan titrasi dengan menggunakan asam, sehingga jumlah alkali yang turut bereaksi dapat diketahui.
Sample yang dipakai saat praktikum adalah margarine sebanyak 1,5916 gram, berdasarkan SNI, untuk pengujian angka penyabunan adalah antara 1,5 – 5,0 gram. Kemudian menambahkan 50 mL larutan KOH yang terbuat dari 40 gram dalam 1 liter alkohol. Pelarut yang dipergunakan untuk melarutkan KOH adalah Alkohol, penambahan alkohol dimaksudkan untuk melarutkan asam lemak hasil hidrolisis agar dapat membantu mempermudah reaksi dengan basa dalam pembentukan sabun.
Untuk proses selanjutnya adalah ditutup dengan pendingin balik selama 30 menit. Sampai proses penyabunan yang selesai. Selama proses ini yang perlu diperhatikan adalah kerapatan dari karet penyumbat yang menyumbat mulut erlenmeyer, kerapatan penyumbat perlu diperhatikan agar uap yang keluar saat proses pemanasan tidak keluar. Dengan menggunakan kondensor atau pendingin balik, uap yang dihasilkan dari pemanasan tersebut akan berubah menjadi embun dan kembali mengalir ke dalam Erlenmeyer.
Proses selanjutnya adalah mendinginkan larutan dengan menggunakan es, penggunaan es dalam proses pendinginan dimaksudkan untuk menurunkan suhu larutan sehingga ketika titrasi tidak terlalu panas. Apabila Suhu larutan terlalu tinggi maka dikhawatirkan terjadinya penguapan KOH. Selanjutnya dititrasi dengan HCl 0,5 N dan menggunakan indikator Phenolphtalein (PP). Untuk mengetahui kelebihan larutan KOH, maka dilakukan titrasi blanko, yaitu titrasi tanpa adanya sample dengan prosedur yang sama.
Kesalahan yang timbul pada saat titrasi adalah penentuan titik akhir, kesalahan ini disebabkan karena perubahan warna yang seharusnya yerjadi adalah dari coklat pekat, kemudian kuning, lalu berubah menjadi putih pucat. Perubahan warna dari kuning ke putih tersebut tidak terlalu kontras dan menyebabkan titik akhir sulit ditentukan.
Berdasarkan praktikum volume titrasi cukup banyak apabila dibandingkan dengan kelompok lain dengan sample yang sama yaitu sebanyak 9,2 mL HCl yang terpakai. Penentuan ini juga hanya dilakukan 1 kali (simplo), sehingga nilai rata-ratanya tidak dapat diketahui.
Untuk mengetahui hasil pengujian tersebut benar atau tidak, maka perlu dibandingkan dengan titrasi blanko yang dilakukan oleh kelompok lain, akan tetapi dalam titrasi blanko juga terjadi kesalahan yaitu pelarut yang dipergunakan untuk melarutkan KOH adalah aquadest, padahal pelarut yang seharusnya dipergunakan adalah alkohol. Hal ini menyebabkan volume titrasi tinggi dan tidak terjadi perubahan warna, perubahan warna yang terjadi seharusnya adalah dari merah muda menjadi bening saat titik akhir tercapai, akan tetapi yang terjadi adalah larutan menjadi semakin pekat dan tidak terjadi perubahan warna menjadi bening kembali. Sehingga hasil titrasi sample tidak dapat dihitung, karena perbandingan dengan titrasi blanko tidak dapat dilakukan.
Selain diakibatkan karena kesalahan dalam penggunaan pelarut, kesalahan titrasi blanko ini dapat disebabkan karena proses penyabunan yang tidak sempurna, kondisi peralatan yang tidak sesuai, dll.
3. Penentuan Asam Lemak Bebas (FFA)
Penentuan asam lemak dapat dipergunakan untuk mengetahui kualitas dari minyak atau lemak, hal ini dikarenakan bilangan asam dapat dipergunakan untuk mengukur dan mengetahui jumlah asam lemak bebas dalam suatu bahan atau sample.
Semakin besar angka asam maka dapat diartikan kandungan asam lemak bebas dalam sample semakin tinggi, besarnya asam lemak bebas yang terkandung dalam sampel dapat diakibatkan dari proses hidrolisis ataupun karena proses pengolahan yang kurang baik.
Seperti halnya pada penentuan angka penyabunan, pada penentuan angka lemak bebas pun (FFA), sample yang dipergunakan adalah margarine dengan merk dagang Blue Band.
Sample yang dipergunakan pada saat praktikum ditimbang dalam keadaan cair, sehingga sample terlebih dahulu dicairkan, proses pencairan dilakukan untuk mempermudah proses titrasi selanjutnya, karena apabila sample dalam keadaan padat akan menyulitkan proses titrasi selanjutnya. Dengan pengecilan ukuran, maka asam lemak yang terkandung dalam bahan akan lebih banyak keluar daripada sample dalam keadaan padat.
Penentuan kadar asam lemak bebas ini dilakukan 2 kali (duplo), Sample yang digunakan dalam penentuan kadar asam lemak bebas tersebut adalah yang pertama sebanyak 28,2919 gram dan yang kedua sebanyak 5,0248 gram.
Setelah proses penimbangan selesai, proses selanjutnya adalah penambahan pelarut. Pelarut yang dipergunakan dalam praktikum penentuan kadar asam lemak bebas adalah alkohol, alkohol yang dipergunakan harus dalam kondisi panas dan netral.
Dalam kondisi yang panas alkohol akan lebih baik dan cepat melarutkan sampel yang juga nonpolar dan kondisi netral dilakukan agar data akhir yang diperoleh benar-benar tepat. Jika kondisi alkohol yang dipergunakan tidak netral, maka hasil titrasi asam-basa menjadi tidak sesuai atau salah.
Dalam memanaskan alkohol, dilakukan dengan menggunakan penangas air, hal ini dilakukan karena titik didih alkohol lebih rendah daripada air. Proses penetralan alkohol dilakukan dengan tes kualitatif menggunakan indikator pH universal.
Apabila kondisi alkohol terlalu asam, maka perlu dilakukan dengan penambahan basa lemah. Dan apabila kondisi alkohol terlalu basa, maka penambahan asam lemah perlu dilakukan.
Pada titrasi dengan menggunakan NaOH 0,1 N dan indikator yang dipakai adalah Phenolphtalein (PP), saat penambahan PP larutan berubah warna menjadi merah muda, padahal seharusnya larutan tidak berwarna, hal ini disebabkan terjadi kesalahan, yaitu alkohol yang dipergunakan dalam titrasi tidak dalam kondisi netral, hal ini menyebabkan nilai yang diperoleh menjadi tidak benar dan jauh dari data yang kedua.
NaOH 0,1 N ssebelumnya sudah distandardisasi dengan menggunakan asam oksalat, titik akhir dari titirasi dicapai saat larutan berubah warna dari bening menjadi merah muda.
Pada saat titrasi sample yang pertama volume titrasi sangat jauh berbeda apabila dibandingkan dengan sample yang kedua, hal ini disebabkan kelalaian saat perubahan warna yang terjadi.
Untuk sample yang pertama, volume NaOH yang sudah dipergunakan adalah sebanyak 4,4 mL. Sedangkan untuk sample yang kedua volume NaOH yang dipergunakan adalah 0,2 mL.
Hasil yangberjauhan ini menyebabkan nilai asam lemak bebas tidak dapat dirata-ratakan, akan tetapi meskipun datanya berselisih jauh kadar dari asam lemak bebas masih dapat dihitung dengan menggunakan rumus :
% FFA =
Normalitas yang dipergunakan adalah normalitas NaOH yang telah distandarisasi. Sementara BM (berat molekul) asam lemak yang dipergunakan adalah BM dari asam palmitat. Hal tersebut dikarenakan berdasarkan teori dalam margarine kandungan lemak yang banyak adalah palmitat karena margarin terbuat dari minyak kelapa sawit sesuai tabel berikut:
Sumber Minyak Jenis Asam Lemak Terbanyak Berat Molekul
Susu
Sawit Palmitat 256
Inti Sawit
Kelapa Laurat 200
Susu Oleat 282
Jagung, Kedelai dan kacang-kacangan Linoleat 278
tabel 1Berat Molekul Asam Lemak dari Sumber Tertentu
Berdasarkan data praktikum dan perhitungan maka dapat diketahui nilai asam lemak bebas dalam sample yang pertama adalah sebesar 0,37026 %. Sementara pada sampel kedua sebesar 0,09476 %. Dari data tersebut maka nilai perhitungan rata-rata tidak dapat dilakukan karena selisih sedua data cukup besar. Hal ini menyebabkan nilai asam lemak bebas yang sebenarnya tetap tidak diketahui.
Kesalahan yang menyebabkan nilai asam lemak bebas menjadi tidak akurat salah satunya adalah dalam penetapan titik akhir, sehingga volume titrasi yang dipakai, dan titik akhir yang sebenarnya terlewat.
F. KESIMPULAN
Berdasarkan data praktikum dan perhitungan maka dapat diketahui bahwa penentuan kadar lemak dengan menggunakan metode Weibull dalam sampel tepung pisang adalah 0,5885 %. Hasil tersebut belum dapat dikatakan mutlak karena hanya dilakukan 1 kali, dan perbandingan hasil perhitungan dilakukan dengan kelompok lain yang mengerjakan dengan metode dan sample yang sama. Metode Weibull dilakukan untuk menghidrolisis lemak yang terikat dalam sample sebelum proses ekstraksi dilakukan.
Hasil perhitungan angka asam lemak bebas (FFA) yang dilakukan duplo untuk sampel I (sebanyak 28,2 gram) adalah 0,37026 %. Sementara sampel kedua (5 gram) adalah 0,09476 %. Kesalahan yang terjadi mengakibatkan nilai asam lemak bebas yang sebenarnya tetap tidak diketahui, selisih nilai persentase yang berjauhan menyebabkan nilai tersebut tidak dapat dirata-rata.
Berdasarkan data pengamatan dan hasil perhitungan, untuk penentuan bilangan penyabunan tidak dapat ditentukan, hal ini dikarenakan kesalahan tidak hanya terjadi pada sample tapi juga pada blanko. Dan menyebabkan data yang dihasilkan tidak dapat dihitung, dan angka penyabunan tetap tidak diketahui.
G. DAFTAR PUSTAKA
• Sudarmadji, Slamet. et al. 1996. Prosedur Analisis Bahan Makanan dan Pertanian.Yogyakarta: Penerbit Liberty.
• Sudarmadji, Slamet. et al. 1996. Analisis Bahan Makanan dan Pertanian.Yogyakarta: Penerbit Liberty.
• Winarno, F.G. 1997. Kimia Pangan dan Gizi. Jakarta: Gramedia.
Praktikum penentuan Analisis Lemak dengan menggunakan metode Weibull, penentuan Angka Penyabunan, dan penentuan Asam Lemak Bebas (FFA).
B. PRINSIP
1. Analisis Kadar Lemak dengan Metode Weibull
Ekstraksi lemak dengan pelarut non polar setelah contoh dihidrolisis dalam suasana asam untuk membebaskan lemak yang terikat.
2. Penentuan Angka Penyabunan
Titrasi kelebihan KOH oleh HCl yang ditetapkan sebagai banyaknya KOH saat titik akhir.
3. Penentuan Asam Lemak Bebas (FFA)
Penentuan presentase asam lemak bebas (FFA) berprinsip pada titrasi sampel yang dilarutkan dengan alkohol netral oleh NaOH untuk menetralkan asam lemak bebas.
C. TUJUAN
1. Analisis Lemak dengan metode Weibull
Melakukan penetapan kadar lemak atau minyak dalam bahan hasil pertanian atau hasil olahanya yang dinyatakan sebagai lemak atau minyak yang terekstraksi.
2. Penentuan Angka Penyabunan
Melakukan penetapan bilangan penyabunan yang dinyatakan sebagai jumlah mg. KOH yang dibutuhkan untuk menyabunkan lemak atau minyak secara sempurna dari 1 g sample.
3. Penentuan Asam Lemak Bebas (FFA)
Melakukan penetapan asam lemak bebas dari sample sebagai persentase bobot dari asam lemak bebas yang ada.
D. REAKSI
REAKSI
E. DASAR TEORI
Lemak atau minyak adalah senyawa makromolekul berupa trigliserida, yaitu sebuah ester yang tersusun dari asam lemak dan gliserol. Jenis dan jumlah asam lemak penyusun suatu minyak atau lemak menentukan karakteristik fisik dan kimiawi minyak atau lemak.
Disebut minyak apabila trigliserida tersebut berbentuk cair pada suhu kamar dan disebut lemak apabila berbentuk padat pada suhu kamar. Asam lemak berdasarkan sifat ikatan kimianya dibedakan menjadi 2 yaitu :
1. asam lemak jenuh
2. asam lemak tidak jenuh
Sebagai zat gizi, lemak atau minyak semakin baik kualitasnya jika banyak mengandung asam lemak tidak jenuh dan sebaliknya. Minyak atau lemak bersifat non polar sehingga tidak larut dalam pelarut polar seperti air dan larutan asam, tetapi larut dalam pelarut organik yang bersifat non polar seperti n-Hexane, Benzene, Chloroform, dll.
Pemilihan bahan pelarut yang paling sesuai untuk ekstraksi lipida adalah dengan menentukan derajat polaritasnya. Pada dasarnya semua bahan akan mudah larut dalam pelarut yang sama polaritasnya. Karena polaritas lipida berbeda-beda maka tidak ada bahan pelarut umum (universal) untuk semua acam lipida.
Contoh di bawah ini menunjukan beberapa bahan jenis pelarut yang sesuai dengan ekstraksi lipida tertentu :
senyawa trigliserida yang bersifat non polar akan mudah diekstraksi dengan pelarut-pelarut non polar misalnya n-Hexane atau petroleum ether
glikolipida yang polar akan mudah diekstraksi dengan alkohol yang polar
lesitin (lecithin) atau secara kimiawi adalah senyawa phosphatidyl-choline bersifat basis dan akan mudah larut dalam pelarut yang sedikit asam misalnya alkohol.
Phosphatidyl-serine yaitu fosfolipida yang bersifat polar dan asam akan mudah larut dalam khloroform yang sedikit polar dan basis.
Senyawa lemak dan minyak merupakan senyawa alami penting yang dapat dipelajari secara lebih mendalam relatif lebih mudah daripada senyawa-senyawa makronutrien yang lain.
Prosedur-prosedur analisa lemka dan minyak berkembang pesat, baik yang menggunakan alat peralatan sederhana maupun yang lebih mutakhir. Kemudahan analisa tersebut dimungkinkan antara lain :
1. molekul lemak dan minyak relatif lebih kecil dan kurang kompleks dibandingkan dengan molekul karbohidrat dan protein.
2. molekul-molekul lemak dan minyak dapat disintesakan di laboratorium menurut kebutuhan, sedangkan molekul protein dan karbohidrat yang kompleks, misalnya lignin belum dapat.
Analisa lemak dan minyak yang umum dilakukan pada bahan makanan dapat digolongkan dalam 3 kelompok tujuan ini :
1. penentuan kuntitatif atau penentuan kadar lemak atau minyak yang terdapat pada bahan pertanian dan olahanya.
2. penentuan kualitas minyak (murni) sebagai bahan makanan yang berkaitan dengan proses ekstraksinya, atau ada tidaknya perlakuan pemurnian lanjutan, misalnya :
penjernihan (refining)
penghilangan bau (deodorizing)
penghilangan warna (bleaching), dll
penentuan tingkat kemurnian minyak ini sangat berhubungan erat dengan kekuatan daya simpannya, sifat gorengnya, bau maupun rasanya.
Tolak ukur kualitasnya ini termasuk angka asam lemak bebas (Free Fatty Acid atau FFA), bilangan peroksida, tingkat ketengikan, dan kadar air.
3. Penentuan sifat fisis maupun kimiawi yang khas atau mencirikan sifat minyak tertentu. Data mengenai sifat minyak ini misalnya :
angka iodin yang menentukan tingkat ketidakjenuhan asam-asam penyusunnya
titik cair (melting point)
angka Reichert-meissel yaitu angka yang menujukan jumlah asam-asam lemak yang dapat larut dalam air dan mudah menguap (panjang rantai C4-C6)
angka Polenske yaitu angka yang menunjukan kadar asam-asam lemak yang mudah menguap tetapi tidak larut dalam air (C8-C14)
angka Kirschner) yang khusus menunjukan jumlah asam butirat
Sedangkan angka penyabunan (Saponification value) menunjukkan secara relatif besar kecilnya molekul asam-asam lemak yang terkandung dalam gliserida. Titik tolak ukur lain misalnya angka indeks refraksi , titik cair, angka kekentalan, titik percik (Flash point), komposisi asam-asam lemak, dll.
Penentuan kadar lemak dengan pelarut, selain lemak juga terikut fosfolipida, sterol, asam lemak bebas, karotenoid dan pigmen yang lain. Karena itu hasil analisanya disebut lemak kasar (crude fat)
Ada 2 cara penentuan kadar lemak berdasarkan jenis bahan yang akan ditentukan :
1. Bahan Kering
Untuk penentuan lemak dari bahan kering, bahan dibungkus atau ditempatkan dalam thimble lalu dikeringkan dalam oven unutk menghilangkan kadar airnya. Ekstraksi lemak dari bahan kering dapat dilakukan secara terputus-putus atau secara berkesinambungan. Ekstraksi secara terputus-putus dilakukan dengan alat soxhlet atau alat ekstraksi ASTM (American Society Testing Material). Sedangkan secara berkesinambungan dengan alat Goldfisch atau ASTM yang telah dimodifikasi.
2. Bahan Basah
Penentuan kadar lemak dari bahan cair dapat menggunakan botol Babcock atau dengan Mojonnier. Sample yang telah ditimbang dimasukan ke dalam botol Babcock setelah melalui beberapa tahap dan disentrifuse lemak akan semakin terpisah dengan cairannya, dan agar dapat dibaca banyaknya lemak maka ke dalam botol ditambahkan aquadest panas sampai lemak tepat pada skala yang terdapat pada leher botol Babcock, dengan demikian banyaknya lemak dapat langsung diketahui.
Sedangkan dengan metode Mojonnier, hasil ekstraksi kemudian diuapkan pelarutnya dan dikeringkan dalam oven sampai diperoleh berat konstan, berat residu dinyatakan sebagai berat lemak atau minyak dalam bahan.
F. ALAT DAN BAHAN
Alat
1. Analisis Kadar lemak Metode Wiebull
• Labu lemak
• Soxhlet
• Hot Plate
• Oven
• Neraca analitik
• Beaker glass
• Corong saring
• Kaca arloji
• Erlenmeyer
• Spatula
• Kertas saring
• Pipet ukur 50 mL
• Pipet tetes
• Bulp
2. Penentuan Angka Penyabunan
• Neraca analitik
• Erlenmeyer 200 mL
• Pipet ukur 50 mL
• Labu ukur
• Pendingin balik (Kompresor)
• Hot plate
• Pipet tetes
• Buret 50 mL
• Spatula
• Batang pengaduk
• Botol semprot
• Beaker glass
• Bulp
3. Penentuan Asam Lemak Bebas (FFA)
• Beaker glass
• Batang pengaduk
• Buret
• Botol semprot
• Hot plate
• Neraca analitik
• Erlenmeyer
• Pipet ukur 50 mL
• Pipet tetes
• Bulp
• Buret 50 mL
Bahan
1. Analisis Kadar Lemak Metode Weibull
• Asam klorida (HCl) 25 %
• n-Hexane
• Aquadest
• Sample tepung pisang
2. Penentuan Angka Penyabunan
• Larutan KOH
• Indikator Phenolphtalein
• Larutan asam klorida (HCl) 0,5 N
• Sample margarine (Blue Band)
3. Penentuan Asam Lemak Bebas (FFA)
• Alkohol netral
• Indikator Phenolphtalein
• Natrium Hidroksida (NaOH) 0,1 N
• Sample Margarine (Blue Band)
G. PROSEDUR
1. Analisis Kadar Lemak Metode Weibull
• Menimbang dengan seksama 1-2 gram contoh ke dalam gelas piala
• Menambahkan HCl 25 % sebanyak 30 mL dan air sebanyak 20 mL, serta beberapa batu didih
• Menutup gelas piala dengan kaca arloji dan didihkan selama 15 menit
• Kemudian menyaringnya dalam keadaan panas dan mencucinya dengan air panas hingga tidak bereaksi asam lagi
• Mengeringkan kertas saring berikut isinya pada suhu 100oC-105oC
• Memasukan ke dalam selongsong keras yang dialasi kapas
• Menyumbat selongsong kertas berisi contoh tersebut dengan kapas
• Memasukan selongsong kertas tersebut ke dalam alat soxhlet yang dihubungkan dengan labu lemak yang telah dikeringkan dan diketahui bobotnya
• Mengekstrak dengan n-Hexane atau pelarut lemak lainnya selama kurang lebih 2-3 jam
• Menyuling n-Hexane dan mengeringkan akstrak lemak dalam oven pengering pada suhu 105oC
• Mendinginkan dalam eksikator dan menimbangnya
• Mengulangi proses pengkonstanan sehingga berat labu konstan
3. Penentuan Angka Penyabunan
• Menimbang contoh dengan teliti antara 1,5-5,0 gram dalam erlenmeyer 200 mL
• Menambah larutan KOH sebanyak 50 mL, yang dibuat dari 40 gram KOH dalam 1 liter akohol
• Menutupnya dengan pendingin balik (kompresor)
• Mendidihkan dengan hati-hati selama 30 menit
• Kemudian didinginkan
• Menambahkan beberapa tetes indikator phenolphtalein (PP)
• Mentitrasi kelebihan larutan KOH dengan larutan standar HCl 0,5 N
• Melakukan titrasi blanko untuk mengetahui kelebihan larutan KOH
3. Penentuan Asam Lemak Bebas (FFA)
• Mengaduk bahan secara merata dan berada dalam keadaan cair pada saat mengambil contohnya
• Menimbang sebanyak 28,2 ± 0,2 gram contoh dalam erlenmeyer
• Menambahkan alkohol netral panas sebanyak 50 mL dan indikator phenolphtalein (PP) sebanyak 2 mL
• Mentitrasi dengan larutan NaOH 0,1 N yang telah distandardisasi sampai warna merah jambu tercapai dan tidak hilang selama 30 detik
• Persen asam lemak bebas dinyatakan sebagai oleat pada kebanyakan minyak dan lemak. Untuk minyak kelapa dan minyak inti kelapa sawit dinyatakan sebagai laurat, sedang pada minyak kelapa sawit dinyatakan sebagai palmitat.
H. DATA PENGAMATAN
1. Analisis Kadar Lemak Metode Weibull
NO Wo Ws Wi % LEMAK Rata-rata
1 84,0050 g 1,8692 g 84,0165 g 0,6152 % -
Kadar lemak
= 0,5885 %
2. Angka Penyabunan
Berat Sampel = 1,5916 gr
NaOH = 9,2 Ml
3. Penentuan Bilangan Asam Lemak Bebas
NO Berat Sample (g) Volume NaOH (mL) Konsentrasi NaOH (N) % FFA
1 28,2919 4,4 0,093 0,37026
2 5,0248 0,2 0,093 0,0947
Sampel I =
=
= 0,37026 %
Sampel II =
=
= 0,09476 %
I. PEMBAHASAN
1. Analisa Kadar Lemak Metode Weibull
Dalam analisa kadar lemak dengan metode weibull ini sample yang dipergunakan adalah tepung pisang, berdasarkan SNI (Standar Nasional Indonesia) berat sample yang dipergunakan untuk analisa kadar lemak adalah sebanyak 1-2 gram, dan saat praktikum sample yang dipergunakan sebanyak 1,8692 gram.
Setelah sample ditimbang, kemudian ditambahkan HCl 25 %, penambahan HCl ini dimaksudkan untuk mendapatkan suasana asam sehingga membantu melepaskan atau membebaskan lemak yang terkandung dalam sample.
Sebelum dipanaskan, sample, HCl dan Aquadest dalam beaker glass ditambahkan batu didih yang berfungsi untuk meredam bumping atau letupan yang mungkin terjadi selama proses pemanasan.
Proses pemanasan dilakukan sampai mendidih selama 15 menit, selama proses pemanasan beaker glass ditutup dengan menggunakan pertridisk, hal ini dilakukan untuk mencegah menyebarnya uap asam yang ditimbulkan dari hasil pemanasan, sehingga selama proses ini dilakukan di tempat yang mempunyai kondisi ventilasi yang baik atau di dekat jendela.
Setelah mendidih, sample kemudian disaring dalam keadaan panas, saat proses penyaringan kelengkapan K3 harus diperhatikan, hal ini dikarenakan uap yang timbul saat penyaringan dapat mengganggu dan berbahaya. Penyaringan dilakukan dengan menggunakan corong gelas yang dilengkapi dengan kertas saring watman, ukuran dari kertas saring yang dipergunakan disesusaikan dengan ukuran corong yang dipergunakan, tinggi dari kertas saring minimal sejajar dengan corong, hal ini dimaksudkan untuk menghindari meresapnya lemak pada dinding corong akibat gaya kapilaritas. Apabila hal ini tidak diperhatikan maka akan mempengaruhi perhitungan kadar lemak yang terkandung pada bahan, dan pengujian menjadi tidak akurat.
Setelah semua bahan disaring, maka endapan yang tersaring dalam kertas saring dibilas dengan menggunakan air panas, proses pembilasan dengan air panas dilakukan untuk membantu melarutkan HCl yang masih terkandung dalam endapan, air dipergunakan untuk membilas endapan karena air bersifat polar dan tidak akan melarutkan lemak atau minyak yang terkandung dalam bahan (karena lemak atau minyak hanya akan larut oleh pelarut non polar) sehingga pembilasan dengan air panas tidak akan berpengaruh pada hasil pengujian.
Pembilasan dengan air ini dilakukan sampai endapan tidak bersifat asam, untuk mengetahui apakah larutan sudah tidak bersifat asam atau tidak, maka perlu dilakukan tes kualitatif, tes kualitatif yang dilakukan adalah dengan menggunakan kertas lakmus biru, apabila kertas lakmus berubah menjadi warna merah muda (pink) maka itu berarti endapan masih mengandung asam, apabila lakmus sudah tidak berubah warna, maka itu berarti endapan sudah tidak bersifat asam dan proses selanjutnya dapat dilakukan.
Proses selanjutnya adalah mengeringkan kertas saring tersebut dalam oven dengan suhu kira-kira 100o-105oC, proses pengeringan dilakukan sampai kertas saring cukup kering, tujuan dari proses pengeringan adalah menguapkan sebagian besar sisa air yang terkandung dalam endapan. Proses pengeringan ini sebaiknya tidak dilakukan terlalu lama, proses pengeringan yang terlalu lama akan mengakibatkan lemak yang terkandung menjadi sulit untuk diekstraksi.
Setelah endapan kering, proses selanjutnya dengan membungkus sample dengan kertas saring yang dibentuk menyerupai selongsong dan kedua ujungnya disumbat dengan kapas bebas lemak, selongsong atau thimbel ini kemudian dimasukan ke dalam alat ekstraksi soxhlet.
Ukuran dari thimbel ini disesuaikan dengan ukuran dari soxhlet yang dipergunakan. Setelah thimbel dimasukan, kemudian pelarut non polar dimasukan ke dalam soxhlet dengan menggunakan pipet ukur, pelarut non polar yang dipergunakan adalah n-Hexane, banyaknya pelarut yang dipergunakan juga disesuaikan dengan soxhlet yang dipergunakan, takarannya adalah 1,5 kali tinggi soxhlet. Pertama-tama adalah mengisi soxhlet sampai penuh dan biarkan mengalir ke bagian labu lemak, kemudian tambahkan lagi sampai setengah bagian soxhlet.
Urutan dari rangkaian peralatan uji kadar lemak ini adalah pada bagian paling bawah hot plate, labu lemak, soxhlet, dan bagian yang paling atas adalah kondensor. Dengan rangkaian yang seperti ini maka ekstraksi dilakukan secara berkesinambungan (Continue). Labu lemak yang dipergunakan adalah labu lemak yang sudah diketahui beratnya secara konstan. Pada saat praktikum labu lemak yang dipergunakan mempunyai berat konstan 84,0050 gram (Wo).
Proses ekstraksi dilakukan minimal 6 kali, dihitung dari berapa kali thimbel dalam soxhlet terbenam oleh pelarut non polar tersebut. Selama proses ekstraksi berlangsung warna pelarut n-Hexane berubah, dari bening menjadi sedikit kekuningan, hal ini disebabkan karena kandungan lemak dalam sample terekstraksi dan merubah warna larutan menjadi agak kekuningan.
Setelah proses ekstraksi selesai dan diperkirakan lemak dalam sample sudah terekstraksi semua, maka proses selanjutnya adalah mengambil pelarut non polar yang dipergunakan dan dimasukan kembali ke dalam wadahnya. Proses pengambilan dilakukan saat ekstraksi masih berlangsung dan hot plate dalam keadaan hidup, pengambilan pelarut dilakukan dengan menggunakan pipet ukur dan pelarut diambil sebelum mengalir ke labu ukur, dengan kata lain masih berada dalam bagian soxhlet, sehingga sambungan antara soxhlet dan pendingin balik atau kondensor dilepaskan dan pipet ukur dimasukan ke dalam bagian soxhlet tersebut.
Karena n-hexane mempunyai titik didih yang lebih rendah dari lemak, maka selama hot plate dinyalakan n-hexane akan menguap dan masuk ke dalam alat pendingin balik atau kondensor, uap pelarut akan mengembun karena uap tersebut didinginkan, tetesan pelarut akan kembali turun ke alat ekstraktor soxhlet dan merendam thimbel yang berisi sample dan lemak yang terkandung dalam sample akan larut oleh pelarut non polar tersebut. Saat soxlet terisi penuh, pelarut dan lemak hasil ekstraksinya akan mengalir ke bagian labu lemak yang dipanaskan dan akan menguapkan pelarut, sehingga yang tersisa hanya lemak yang terekstraksi karena pelarut mempunyai titik didih yang lebih rendah.
Sehingga apabila pelarut diambil dari bagian soxhlet, maka proses diatas akan terputus dan menyebabkan proses ekstraksi terhenti menyisakan lemak yang terdapat dalam labu lemak. Hasil ekstraksi inilah yang dinyatakan sebagai kandungan lemak yang terdapat dalam sample.
Setelah proses ekstraksi selesai, maka lebu lemak yang terdapat pada bagian bawah dipisahkan dari rangkaian kemudian dikeringkan di dalam oven dengan suhu 105oC sampai kira-kira kertas saring kering, proses pengeringan dilakukan untuk menguapkan pelarut yang masih terkandung dalam labu lemak yang dapat mempengaruhi berat sample, karena proses selanjutnya adalah penimbangan.
Berdasarkan data praktikum dapat diketahui berat labu ukur dan lemak hasil ekstraksi (Wi) adalah 84,0165 gram. Dan berdasarkan perhitungan maka lemak yang terkandung dalam sample adalah 0,6152 %.
2. Penentuan Angka Penyabunan
Berbeda dengan penentuan kadar lemak, sample yang dipergunakan untuk penentuan angka penyabunan adalah margarine dengan merk dagang Blue Band. Penentuan bilangan penyabunan ini dapat dipergunakan untuk mengetahui sifat minyak dan lemak. Pengujian sifat ini dipergunakan untuk membedakan lemak yang satu dengan yang lainnya.
Selain untuk mengetahui sifat fisik lemak atau minyak, angka penyabunan juga dapat dipergunakan untuk menentukan berat molekul minyak dan lemak secara kasar.
Apabila sample yang akan diuji disabunkan dengan larutan KOH berlebih dalam alkohol, maka KOH akan bereaksi dengan trigliserida, yaitu tiga molekul KOH bereaksi dengan satu molekul minyak atau lemak. Larutan alkali yang tertinggal tersebut kemudian ditentukan dengan titrasi dengan menggunakan asam, sehingga jumlah alkali yang turut bereaksi dapat diketahui.
Sample yang dipakai saat praktikum adalah margarine sebanyak 1,5916 gram, berdasarkan SNI, untuk pengujian angka penyabunan adalah antara 1,5 – 5,0 gram. Kemudian menambahkan 50 mL larutan KOH yang terbuat dari 40 gram dalam 1 liter alkohol. Pelarut yang dipergunakan untuk melarutkan KOH adalah Alkohol, penambahan alkohol dimaksudkan untuk melarutkan asam lemak hasil hidrolisis agar dapat membantu mempermudah reaksi dengan basa dalam pembentukan sabun.
Untuk proses selanjutnya adalah ditutup dengan pendingin balik selama 30 menit. Sampai proses penyabunan yang selesai. Selama proses ini yang perlu diperhatikan adalah kerapatan dari karet penyumbat yang menyumbat mulut erlenmeyer, kerapatan penyumbat perlu diperhatikan agar uap yang keluar saat proses pemanasan tidak keluar. Dengan menggunakan kondensor atau pendingin balik, uap yang dihasilkan dari pemanasan tersebut akan berubah menjadi embun dan kembali mengalir ke dalam Erlenmeyer.
Proses selanjutnya adalah mendinginkan larutan dengan menggunakan es, penggunaan es dalam proses pendinginan dimaksudkan untuk menurunkan suhu larutan sehingga ketika titrasi tidak terlalu panas. Apabila Suhu larutan terlalu tinggi maka dikhawatirkan terjadinya penguapan KOH. Selanjutnya dititrasi dengan HCl 0,5 N dan menggunakan indikator Phenolphtalein (PP). Untuk mengetahui kelebihan larutan KOH, maka dilakukan titrasi blanko, yaitu titrasi tanpa adanya sample dengan prosedur yang sama.
Kesalahan yang timbul pada saat titrasi adalah penentuan titik akhir, kesalahan ini disebabkan karena perubahan warna yang seharusnya yerjadi adalah dari coklat pekat, kemudian kuning, lalu berubah menjadi putih pucat. Perubahan warna dari kuning ke putih tersebut tidak terlalu kontras dan menyebabkan titik akhir sulit ditentukan.
Berdasarkan praktikum volume titrasi cukup banyak apabila dibandingkan dengan kelompok lain dengan sample yang sama yaitu sebanyak 9,2 mL HCl yang terpakai. Penentuan ini juga hanya dilakukan 1 kali (simplo), sehingga nilai rata-ratanya tidak dapat diketahui.
Untuk mengetahui hasil pengujian tersebut benar atau tidak, maka perlu dibandingkan dengan titrasi blanko yang dilakukan oleh kelompok lain, akan tetapi dalam titrasi blanko juga terjadi kesalahan yaitu pelarut yang dipergunakan untuk melarutkan KOH adalah aquadest, padahal pelarut yang seharusnya dipergunakan adalah alkohol. Hal ini menyebabkan volume titrasi tinggi dan tidak terjadi perubahan warna, perubahan warna yang terjadi seharusnya adalah dari merah muda menjadi bening saat titik akhir tercapai, akan tetapi yang terjadi adalah larutan menjadi semakin pekat dan tidak terjadi perubahan warna menjadi bening kembali. Sehingga hasil titrasi sample tidak dapat dihitung, karena perbandingan dengan titrasi blanko tidak dapat dilakukan.
Selain diakibatkan karena kesalahan dalam penggunaan pelarut, kesalahan titrasi blanko ini dapat disebabkan karena proses penyabunan yang tidak sempurna, kondisi peralatan yang tidak sesuai, dll.
3. Penentuan Asam Lemak Bebas (FFA)
Penentuan asam lemak dapat dipergunakan untuk mengetahui kualitas dari minyak atau lemak, hal ini dikarenakan bilangan asam dapat dipergunakan untuk mengukur dan mengetahui jumlah asam lemak bebas dalam suatu bahan atau sample.
Semakin besar angka asam maka dapat diartikan kandungan asam lemak bebas dalam sample semakin tinggi, besarnya asam lemak bebas yang terkandung dalam sampel dapat diakibatkan dari proses hidrolisis ataupun karena proses pengolahan yang kurang baik.
Seperti halnya pada penentuan angka penyabunan, pada penentuan angka lemak bebas pun (FFA), sample yang dipergunakan adalah margarine dengan merk dagang Blue Band.
Sample yang dipergunakan pada saat praktikum ditimbang dalam keadaan cair, sehingga sample terlebih dahulu dicairkan, proses pencairan dilakukan untuk mempermudah proses titrasi selanjutnya, karena apabila sample dalam keadaan padat akan menyulitkan proses titrasi selanjutnya. Dengan pengecilan ukuran, maka asam lemak yang terkandung dalam bahan akan lebih banyak keluar daripada sample dalam keadaan padat.
Penentuan kadar asam lemak bebas ini dilakukan 2 kali (duplo), Sample yang digunakan dalam penentuan kadar asam lemak bebas tersebut adalah yang pertama sebanyak 28,2919 gram dan yang kedua sebanyak 5,0248 gram.
Setelah proses penimbangan selesai, proses selanjutnya adalah penambahan pelarut. Pelarut yang dipergunakan dalam praktikum penentuan kadar asam lemak bebas adalah alkohol, alkohol yang dipergunakan harus dalam kondisi panas dan netral.
Dalam kondisi yang panas alkohol akan lebih baik dan cepat melarutkan sampel yang juga nonpolar dan kondisi netral dilakukan agar data akhir yang diperoleh benar-benar tepat. Jika kondisi alkohol yang dipergunakan tidak netral, maka hasil titrasi asam-basa menjadi tidak sesuai atau salah.
Dalam memanaskan alkohol, dilakukan dengan menggunakan penangas air, hal ini dilakukan karena titik didih alkohol lebih rendah daripada air. Proses penetralan alkohol dilakukan dengan tes kualitatif menggunakan indikator pH universal.
Apabila kondisi alkohol terlalu asam, maka perlu dilakukan dengan penambahan basa lemah. Dan apabila kondisi alkohol terlalu basa, maka penambahan asam lemah perlu dilakukan.
Pada titrasi dengan menggunakan NaOH 0,1 N dan indikator yang dipakai adalah Phenolphtalein (PP), saat penambahan PP larutan berubah warna menjadi merah muda, padahal seharusnya larutan tidak berwarna, hal ini disebabkan terjadi kesalahan, yaitu alkohol yang dipergunakan dalam titrasi tidak dalam kondisi netral, hal ini menyebabkan nilai yang diperoleh menjadi tidak benar dan jauh dari data yang kedua.
NaOH 0,1 N ssebelumnya sudah distandardisasi dengan menggunakan asam oksalat, titik akhir dari titirasi dicapai saat larutan berubah warna dari bening menjadi merah muda.
Pada saat titrasi sample yang pertama volume titrasi sangat jauh berbeda apabila dibandingkan dengan sample yang kedua, hal ini disebabkan kelalaian saat perubahan warna yang terjadi.
Untuk sample yang pertama, volume NaOH yang sudah dipergunakan adalah sebanyak 4,4 mL. Sedangkan untuk sample yang kedua volume NaOH yang dipergunakan adalah 0,2 mL.
Hasil yangberjauhan ini menyebabkan nilai asam lemak bebas tidak dapat dirata-ratakan, akan tetapi meskipun datanya berselisih jauh kadar dari asam lemak bebas masih dapat dihitung dengan menggunakan rumus :
% FFA =
Normalitas yang dipergunakan adalah normalitas NaOH yang telah distandarisasi. Sementara BM (berat molekul) asam lemak yang dipergunakan adalah BM dari asam palmitat. Hal tersebut dikarenakan berdasarkan teori dalam margarine kandungan lemak yang banyak adalah palmitat karena margarin terbuat dari minyak kelapa sawit sesuai tabel berikut:
Sumber Minyak Jenis Asam Lemak Terbanyak Berat Molekul
Susu
Sawit Palmitat 256
Inti Sawit
Kelapa Laurat 200
Susu Oleat 282
Jagung, Kedelai dan kacang-kacangan Linoleat 278
tabel 1Berat Molekul Asam Lemak dari Sumber Tertentu
Berdasarkan data praktikum dan perhitungan maka dapat diketahui nilai asam lemak bebas dalam sample yang pertama adalah sebesar 0,37026 %. Sementara pada sampel kedua sebesar 0,09476 %. Dari data tersebut maka nilai perhitungan rata-rata tidak dapat dilakukan karena selisih sedua data cukup besar. Hal ini menyebabkan nilai asam lemak bebas yang sebenarnya tetap tidak diketahui.
Kesalahan yang menyebabkan nilai asam lemak bebas menjadi tidak akurat salah satunya adalah dalam penetapan titik akhir, sehingga volume titrasi yang dipakai, dan titik akhir yang sebenarnya terlewat.
F. KESIMPULAN
Berdasarkan data praktikum dan perhitungan maka dapat diketahui bahwa penentuan kadar lemak dengan menggunakan metode Weibull dalam sampel tepung pisang adalah 0,5885 %. Hasil tersebut belum dapat dikatakan mutlak karena hanya dilakukan 1 kali, dan perbandingan hasil perhitungan dilakukan dengan kelompok lain yang mengerjakan dengan metode dan sample yang sama. Metode Weibull dilakukan untuk menghidrolisis lemak yang terikat dalam sample sebelum proses ekstraksi dilakukan.
Hasil perhitungan angka asam lemak bebas (FFA) yang dilakukan duplo untuk sampel I (sebanyak 28,2 gram) adalah 0,37026 %. Sementara sampel kedua (5 gram) adalah 0,09476 %. Kesalahan yang terjadi mengakibatkan nilai asam lemak bebas yang sebenarnya tetap tidak diketahui, selisih nilai persentase yang berjauhan menyebabkan nilai tersebut tidak dapat dirata-rata.
Berdasarkan data pengamatan dan hasil perhitungan, untuk penentuan bilangan penyabunan tidak dapat ditentukan, hal ini dikarenakan kesalahan tidak hanya terjadi pada sample tapi juga pada blanko. Dan menyebabkan data yang dihasilkan tidak dapat dihitung, dan angka penyabunan tetap tidak diketahui.
G. DAFTAR PUSTAKA
• Sudarmadji, Slamet. et al. 1996. Prosedur Analisis Bahan Makanan dan Pertanian.Yogyakarta: Penerbit Liberty.
• Sudarmadji, Slamet. et al. 1996. Analisis Bahan Makanan dan Pertanian.Yogyakarta: Penerbit Liberty.
• Winarno, F.G. 1997. Kimia Pangan dan Gizi. Jakarta: Gramedia.
Jumat, 19 Februari 2010
IDENTIFIKASI NILAI Rf PADA ANALISA KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS & KERTAS
IDENTIFIKASI NILAI Rf PADA ANALISA WARNA
DENGAN KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS DAN KROMATOGRAFI KERTAS
A. ACARA
Identifikasi nilai Rf pada analisa warna dengan kromatografi lapis tipis dan kromatografi kertas.
B. PRINSIP
a. kromatografi lapis tipis : memisahkan komponen-komponen atas perbedaan adsorpsi atau partisi oleh fasa diam yang berupa lapisan tipis dari silica gel dibawah gerakan fasa gerak yaitu n-hexan.
b. kromatografi kertas : memisahkan komponen-komponen atas perbedaan adsorpsi atau partisi oleh fasa diam yang berupa kertas dibawah gerakan fasa gerak yaitu n-hexan.
C. TUJUAN
Mengetahui nilai Rf dari masing-masing warna baik pada metode kromatografi kertas maupun kromatografi lapis tipis.
D. DASAR TEORI
Kromatografi adalah suatu istilah umum yang digunakan untuk bermacam-macam teknik pemisahan yang didasarkan atas partisi sampel diantara suatu fasa gerak yang bisa berupa gas ataupun cair dan fasa diam yang juga bisa berupa cairan ataupun suatu padatan. Kromatografi adalah suatu teknik pemisahan campuran berdasarkan perbedaan kecepatan perambatan komponen dalam medium tertentu.
Kromatografi berkembang menjadi teknik pemisahan untuk zat kimiawi dengan sifat yang sangat mirip, dan dapat digunakan untuk identifikasi kualitatif dan penetapan kuantitatif untuk zat-zat yang sudah dipisahkan. Keuntungan-keuntungan dari Kromatografi diantaranya :
1. Kromatografi merupakan metoda pemisahan yang cepat, mudah dan menggunakan peralatan yang murah serta sederhana, kecuali untuk kromatografi gas, hingga campuran yang kompleks dapat dipisahkan dengan mudah.
2. Kromatografi hanya membutuhkan campuran cuplikan.yang sangat sedikit sekali, bahkan tidak menggunakan jumlah yang besar, disamping itu kromatografi pekerjaannya dapat diulang.
a. Kromatografi Kertas
Kromatografi kertas termasuk dalam kelompok kromatografi planar, dimana pemisahannya menggunakan medium pemisah dalam bentuk bidang (umumnya bidang datar) yaitu benuk kertas. Seluruh bentuk kromatografi memiliki fase diam (berupa padatan atau cairan yang didukung pada padatan) dan fase gerak (cairan atau gas). Fase gerak mengalir melalui fase diam dan membawa komponen-komponen dari campuran bersama-sama. Komponen-komponen yang berbeda akan bergerak pada laju yang berbeda pula.
Dalam kromatografi kertas, fase diam adalah kertas serap yang sangat seragam. Fase gerak adalah pelarut atau campuran pelarut yang sesuai.
Berbagai jenis pemisahan yang sederhana dengan Kromatografi kertas telah dilakukan dimana proses dikenal sebagai "analisa Kapiler". Metoda-metoda ini sangat sesuai dengan kromatografi serapan, dan sekarang kromatografi kertas dipandang sebagai perkembangan dari sistem partisi. Salah satu zat padat dapat digunakan untuk menyokong fasa tetap yaitu bubuk selulosa.
Pada kromatografi Kertas peralatan yang dipakai tidak perlu alat-alat yang teliti atau mahal. Hasil-hasil yang baik dapat diperoleh dengan peralatan dan materi-materi yang sangat sederhana. Senyawa-senyawa yang terpisahkan dapat dideteksi pada kertas dan dapat segera diidentifikasikan. Bahkan jika dikehendaki, komponen-komponen yang terpisahkan dapat diambil dari kertas dengan jalan memotong-motongnya, kemudian dilarutkan secara terpisah.
b. Kromatografi Lapis Tipis (thin Layer Chromatography)
Teknik TLC/KLT fasa diam (terutama silika, alumina, dan selulosa) dilapiskan di permukaan sbuah plat pendukung (umumnya dibuat dari bahan kaca atau lembaran logam Al). Bila noda telah kering plat diletakkan secara vertikal dalam bejana yang sesuai dengan tepi yang di bawah dicelupkan dalam fasa bergerak yang terpilih, maka pemisahan kromatografi penaikan akan diperoleh. Pada akhir perkembangan, pelarut dibiarkan menguap dari plat dan noda-noda yang terpisah dilokalisir dan diidentifikasi dengan cara-cara fisika dan kimia seperti yang digunakan dalam kromatografi kertas.
Bila dibandingkan dengan kromatografi kertas, metoda Iapisan tipis mempunyai keuntungan, yaitu membutuhkan waktu yang lebih cepat dan diperoleh pemisahan yang lebih baik. Waktu rata-rata untuk kromatografi lapisan tipis dengan panjang 10 cm pada silika gel adalah sekitar 20 - 30 menit (tergantung dari sifat fasa bergerak), sedangkan pemisahan yang sama dengan memerlukan waktu dua jam. Untuk pemisahan-pemisahan secara kualitatif pada plat yang kecil memerlukan waktu sekitar 5 menit.
Hasil pemisahan yang baik ternyata bahwa penyerap dalam kromatografi lapisan tipis mempunyai kapasitas yang lebih besar bila dibandingkan dengan kertas. Keuntungan dari sistem serapan ialah dapat digunakan untuk memisahkan senyawa-senyawa yang sifatnya hidrofobi, seperti lipida-lipida dan hidrokarbon, di mana hal ini sukar dikerjakan dengan kertas. Sekarang pemisahan dengan lapisan tipis banyak digunakan dalam kimia organik dan beberapa dalam kimia anorganik. Lokasi dari senyawa-senyawa yang terpisah pada lapisan tipis dikerjakan seperti pada kertas, tetapi pereaksi-pereaksi yang lebih reaktif seperti asam sulfat dapat digunakan pada lapisan tipis, dengan catatan bahwa materi lapisan tipis adalah senyawa yang tak bereaksi seperti silika gel atau alumina.
E. ALAT DAN BAHAN
Alat :
1. Kromatografi Kertas
• kertas saring (fasa diam)
• bejana
• penggaris
• beaker glass
• penangas air
• spatula
• corong
• batang pengaduk
• mortar
2. Kromatografi Lapis Tipis
• kaca preparat kecil
• kaca preparat besar (20x20 cm)
• beaker glass
• neraca
• spatula
• kaca arloji
• gelas ukur
• pipet tetes
• penyuntik sampel
• penangas air
• corong
• batang pengaduk
• mortar
Bahan :
1. Kromatografi Kertas
• n-Hexane (fasa gerak)
• Kloroform
• daun menir
2. Kromatografi Lapis Tipis
• n-Hexane (fasa gerak)
• Kloroform
• silica gel (bahan penyerap)
• bunga bouganvile
F. PROSEDUR
a. Pembuatan lapisan tipis kecil
1. 2 gelas mikroskop yang dilekatkan satu sama lain dicelupkan dalam bubur silica gel (bubur silica gel dibuat dengan mencampurkannya dengan kloroform yang diaduk sampai homogen).
2. Setelah dicelupkan diangkat kembali, biarkan hingga kering di udara. Setelah kering bagian sisi yang terletak di sebelah dalam dari masing-masing gelas dibersihkan dengan kertas kering.
b. Pembuatan lapisan tipis besar
1. Timbang silika gel sebanyak 12 gram, tambah air sebanyak 27 ml diaduk sampai homogen, air yang digunakan adalah aquadest.
2. Tuangkan pada gelas mikroskop besar, 20x20 cm dan usahakan mendapatkan tebal permukaan yang serata mungkin dengan mengetep-ngetepnya diatas gabus.
3. Plat gelas yang telah dilapisi silika gel dikeringkan untuk diaktifkan dengan jalan memanaskan dalam oven dengan suhu 100°C selam 30 menit, makin lama makin baik.
c. Pembuatan cuplikan
Dipakai zat dari tumbuhan, misalnya kunir, daun atau bunga-bungaan, dapat juga zat organik yang tak berwarna.
1. Kunir, daun atau bunga dipotong-potong dan dilumatkan sampai halus dengan lumping porselen dan diekstrak dengan pelarut organik, contoh : kloroform atau pelarut lain.
2. Ekstrak disaring ambil bagian yang terlarut dalam kloroform kemudian diuapkan sehingga diperoleh larutan yang pekat.
d. Pembuatan kromatogram
1. Diatas lapisan tipis, teteskan zat yang akan dikromatografikan dengan pipa kapiler pada jarak kira-kira 1 cm dari bagian bawah kaca. Untuk plat yang kecil noda berupa titik, sedangkan untuk plat besar 20x20 cm berupa deretan titik-titik sehingga membentuk garis, biarkan beberapa saat hingga kering.
2. Lapisan tipis yang mengandung cuplikan dimasukkan dalam satu bejana yang berisi fasa gerak, untuk lapisan tipis yang kecil dapat ditempatkan dalam gelas piala bagian yang mengandung cuplikan dicelupkan dalam fasa gerak, noda jangan sampai tercelup dalam fasa gerak.
3. Setelah fasa gerak naik sampai hampir ujung atas lapisan, lapisan tipis diambil dari bejana atau gelas piala. Untuk plat kecil batas fasa bergerak dan noda-noda diberi tanda biarakan kering di udara.
4. Untuk mengetahui lokasi noda (bila tidak terlihat) maka setelah lapisan tipis kecil kering dimasukkan dalam gelas piala yang di dalamnya diberi Kristal iod.
5. Tentukan harga Rf untuk lapisan tipis kecil.
6. Penanganan plat besar selanjutnya bila dikehendaki untuk mendapatkan hasil pemisahan maka pita-pita yang merupakan komponen-komponen senyawa masing-masing dikeruk dan dikumpulkan secara terpisah, tiap-tiap bagian dicuci dengan kloroform yang kemudian perlu di uji lebih lanjut dengan menggunakan lapisan tipis untuk mengetahui apakah masing-masing bagian marupakan komponen tunggal atau masih merupakan campuran.
G. DATA HASIL PENGAMATAN
1. Kromatografi Kertas
Jarak yang ditempuh pelarut (cm) Jarak yang ditempuh senyawa (cm)
Hijau (Klorofil) Kuning Orange
15 7,5 11,5 15,1
Nilai Rf = Jarak yang ditempuh senyawa : jarak yang ditempuh pelarut
• hijau (klorofil)
Rf = 7,5 : 15
= 0,5 cm
• Kuning
Rf = 11,5 : 15
= 0,76 cm
• Orange
Rf = 15,1 : 15
= 1,0067 cm
2. Kromatografi Lapis Tipis
Jarak yang ditempuh pelarut (cm) Jarak yang ditempuh senyawa (cm)
6,5 2,4
Nilai Rf = jarak yang ditempuh senyawa : jarak yang ditempuh pelarut
= 2,4 : 6,5
= 0,3692 cm
H. PEMBAHASAN
a. Kromatografi Lapis Tipis (Thin Layer Chromatography)
Sampel yang dipergunakan dalam analisa KLT adalah bunga bouganvile, bunganya berwarna merah muda. bunga ini diekstrak dengan menggunakan kloroform terlebih dahulu sebelum dipergunakan untuk analisa.
Penanganan sampel yang pertama adalah memisahkan bunga yang akan dieksrak dengan daun dan ranting dari tanaman asalnya, saat praktikum jumlah dari bunga yang akan diekstrak adalah secukupnya (sekitar segenggam tangan), setelah dibersihkan bunga dipotong-potong dan kemudian dihaluskan secara manual dengan menggunakan mortar. Setelah cukup halus, kemudian tambahkan kloroform untuk mengekstrak zat-zat warna yang larut dengan pelarut organik yang terkandung dalam sample.
Jumlah kloroform yang ditambahkan secukupnya atau sampai sampel terbenam dengan pelarut, hal ini dimamaksudkan agar zat-zat warna yang terkandung dalam sampel dapat terekstrak dengan maksimal. hasil ekstraksi dari bunga bouganvile ini berwarna hijau muda transparan.
hasil ekstraksi kemudian dipanaskan untuk menguapkan pelarut organiknya, karena plearut organic menguap pada suhu dibawah 100oC sehingga proses pemanasan dilakukan diatas penangas air untuk memghindari kemungkinan terjadinya pemansan yang terlalu tinggi hingga hasil ekstraksi yang dipanaskan menjadi kering.
Dalam KLT, fasa diam yang dipergunakan adalah terutama silica gel, alumina dan selulosa. Menurut teori jika fasa diam yang dipergunakan adalah silica gel, maka pelarut yang dipergunakan adalah aquadest, akan tetapi saat praktikum, pelarut yang dipergunakan untuk melarutkan silica gel adalah pelarut organic yaitu kloroform. dibandingkan dengan aquadest kloroform merupakan pelarut yang mudah menguap sehingga plat yang sudah dilapisi dengan bubur silica gel, tidak perlu mengalami proses “pengaktifan” cukup dibiarkan di udara terbuka sampai kering.
Plat gelas yang dipergunakan pada saat praktikum berukuran kecil (gelas preparat/ mikroskop slide), sebelum dipergunakan plat tersebut terlebih dahulu dibersihkan dengan menggunakan tisu yang dibasahi dengan alcohol 70%. Setelah dibersihkan plat tersebut kemudian dikeringkan.
Proses pelapisan plat dengan bubur silica gel dilakukan diatas plat gelas kaca berukuran besar (20 x 20 cm) Karena permukaannnya rata. plat kecil yang dilapisi dengan bubur silica gel diletakan berdampingan dan bagian pinggirnya saling menempel sehingga permukaannya saling berhadapan ke atas.
Dalam 1 kali proses pelapisan, plat yang dilapisi ada 2. bagian pinggir luar plat ditahan dengan menggunakan gelas preparat yang lain sebanyak 2 tumpuk,. Kemudian bubur silica gel ditungkan diatas permukaan plat dan bagian atasnya didorong dengan kaca preparat yang lain, karena terdapat penahan sebanyak 2 tumpuk maka hal ini akan membuat tinggi lapisan bubur silica gel menjadi rata saat didorong dengan kaca preparat, hal ini dilakukan untuk menghindari kemungkinan terjadinya permukaan plat yang dilapisi tidak rata dan bergelombang sehingga akan mempengaruhi pemisahan padat saat pengambangan gerakan fasa gerak tidak sempurna atau alirannya terganggu. proses ini harus dilakukan secepat mungkin, karena silica gel yang dilarutkan dengan kloroform cepat sekali mengering.
setelah plat sudah dilapisi selanjutnya dibiarkan kering, proses pengeringannya cukup cepat karena pelarut yang dipergunakan untuk menglarutkan silica gel adalah kloroform, jika menggunakan pelarut aquadest, silica gel diatas plat membutuhkan waktu yang lebih lama untuk kering sehingga harus dikeringkan didalam oven terlebih dahulu untuk mempercepat proses pengeringannya.
silica gel yang sudah kering diatas plat tersebut kemudian ditetesi dengan sampel, proses penetesan sampel ini sulit sekali dilakukan, selain jumlah sampel yang harus diteteskan sedikit sekali, juga karena silica gel kering diatas plat tersebut tidak dapat menyerap sampel. setelah sampel diteteskan dengan menggunakan alat suntik, selanjutnya plat dimasukan kedalam beaker glass yang berisi fasa gerak dan ditutup dengan platik wrap, fasa gerak yang dipergunakan saat praktikum adalah n-hexane.
plat dimasukan kedalam beaker glass dengan posisi berdiri, sehingga jumlah fasa gerak didalam beaker glass tidak boleh melebihi tinggi sampel yang diteteskan diatas plat. kemudian ditutup kembali, saat praktikum noda sampel yang berhasil diteteskan dengan baik diatas plat hanya 1, dan nodanya berwarna hijau yang diperkirakan klorofil.
dari hasil praktikum tersebut maka jarak yang ditempuh pelarut n-hexane dalam KLT adalah 6,5 cm, dan jarak yang ditempuh senyawa yang terbawa oleh pelarut adalah 2,4 cm. dari data tersebut maka harga Rf-nya adalah 0,3692 cm.
b. Kromatografi kertas
sampel yang dipergunakan berbeda dengan sampel pada KLT, pada kromatografi kertas sampel yang dipergunakan yaitu daun menir yang berwana dominan hijau dengan bintik merah dan kuning.
proses preparasi sampel pada kromatografi kertas sama dengan preparasi sampel pada KLT, yaitu sampel dihaluskan dengan menggunakan mortar, ditambahkan pelarut kloroform kemudian dipanaskan diatas penangas air sampai sampel mengental.
pada kromatografi kertas, fasa diam yang dipergunakan adalah kertas yang sangat beragam dan saat praktikum dipergunakan kertas saring yang dipotong persegi panjang, dengan fasa gerak pelarut organic n-hexane. tidak seperti pada KLT, pada kromatografi kertas prosesnya cukup cepat, selain proses penetesan sampel tidak terlalu rumit, kromatografi kertas juga tidak perlu menunggu fasa diam kering untuk meneteskan sampel.
sebelum noda sampel diteteskan, terlebih dahulu kertas saring diberi garis dengan menggunakan pensil untuk membuat jarak antara noda dengan pelarut dibawahnya, dan yang kedua adalah membuat tanda untuk meneteskan sampel yang berjarak ± 2 cm. pada saat praktikum penetesan sampel dilakukan menggunakan tusuk gigi, saat penetesan noda sampel, fasa diam berada dalam posisi mendatar dan noda dibiarkan mengering terlebih dahulu sebelum dimasukan kedalam bejana yang berisi fasa gerak. penetesan noda yang terlalu banyak harus dihindari, karena kelebihan setiap komponen akan menyebabkan tidak akan terca¬painya kesetimbangan partisi selama ia bergerak, hingga ia akan mengakibatkan terjadinya kedudukan atau lokasi yang kabur.
setelah noda sampel mengering, kertas dimasukan kedalam bejana sudah jenuh dengan fasa gerak yaitu n-hexane, kertas saring berisi noda yang sudah kering tersebut diposisikan tegak berdiri dan bagian bawahnya terbenam dalam fasa gerak.
metoda yang dipakai dalam kromatografi kertas ini adalah metoda penaikan, yaitu kertas dicelupkan hingga ujung di mana aliran mulai bergerak terletak sedikit di atas per¬mukaan dari pelarut dan pelarut naik melalui serat-serat dari kertas oleh gaya kapiler. kertas sebagai serat-serat selulosa dengan lapisan yang sangat tipis dari molekul-molekul air yang berikatan pada permukaan. Interaksi ini dengan air merupakan efek yang sangat penting selama pengerjaan kromatografi kertas.
noda-noda yang naik dari sampel daun menir ini terdiri dari 3 warna, yaitu hijau, kuning dan orange. jarak yang ditempuh dari masing-masing warna adalah hijau 7,5 cm; warna kuning 11,5 cm; dan warna orange 15,1. sedangkan jarak yang ditempuh pelarut adalah 15 cm. dari data tersebut maka harga Rf untuk masing-masing warna adalah, warna hijau 0,5 cm; warna kuning0,76 cm; dan warna orange 1,0067 cm.
harga Rf dari kromatografi kertas ini cukup tinggi, salah satu penyebabnya adalah penggunaan n-hexane sebagai fasa gerak, molekul-molekul polar akan memiliki atraksi yang tinggi untuk molekul-molekul air dan kurang untuk pelarut yang non polar. Molekul-molekul polar dalam campuran sampel memiliki sedikit atraksi antara molekul-molekul air dan molekul-molekul yang melekat pada selulosa, dan karena akan menghabiskan banyak waktunya untuk larut dalam pelarut yang bergerak. Molekul-molekul seperti ini akan bergerak sepanjang kertas diangkut oleh pelarut. hal inilah yang menyebabkan nilai Rf menjadi tinggi.
DENGAN KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS DAN KROMATOGRAFI KERTAS
A. ACARA
Identifikasi nilai Rf pada analisa warna dengan kromatografi lapis tipis dan kromatografi kertas.
B. PRINSIP
a. kromatografi lapis tipis : memisahkan komponen-komponen atas perbedaan adsorpsi atau partisi oleh fasa diam yang berupa lapisan tipis dari silica gel dibawah gerakan fasa gerak yaitu n-hexan.
b. kromatografi kertas : memisahkan komponen-komponen atas perbedaan adsorpsi atau partisi oleh fasa diam yang berupa kertas dibawah gerakan fasa gerak yaitu n-hexan.
C. TUJUAN
Mengetahui nilai Rf dari masing-masing warna baik pada metode kromatografi kertas maupun kromatografi lapis tipis.
D. DASAR TEORI
Kromatografi adalah suatu istilah umum yang digunakan untuk bermacam-macam teknik pemisahan yang didasarkan atas partisi sampel diantara suatu fasa gerak yang bisa berupa gas ataupun cair dan fasa diam yang juga bisa berupa cairan ataupun suatu padatan. Kromatografi adalah suatu teknik pemisahan campuran berdasarkan perbedaan kecepatan perambatan komponen dalam medium tertentu.
Kromatografi berkembang menjadi teknik pemisahan untuk zat kimiawi dengan sifat yang sangat mirip, dan dapat digunakan untuk identifikasi kualitatif dan penetapan kuantitatif untuk zat-zat yang sudah dipisahkan. Keuntungan-keuntungan dari Kromatografi diantaranya :
1. Kromatografi merupakan metoda pemisahan yang cepat, mudah dan menggunakan peralatan yang murah serta sederhana, kecuali untuk kromatografi gas, hingga campuran yang kompleks dapat dipisahkan dengan mudah.
2. Kromatografi hanya membutuhkan campuran cuplikan.yang sangat sedikit sekali, bahkan tidak menggunakan jumlah yang besar, disamping itu kromatografi pekerjaannya dapat diulang.
a. Kromatografi Kertas
Kromatografi kertas termasuk dalam kelompok kromatografi planar, dimana pemisahannya menggunakan medium pemisah dalam bentuk bidang (umumnya bidang datar) yaitu benuk kertas. Seluruh bentuk kromatografi memiliki fase diam (berupa padatan atau cairan yang didukung pada padatan) dan fase gerak (cairan atau gas). Fase gerak mengalir melalui fase diam dan membawa komponen-komponen dari campuran bersama-sama. Komponen-komponen yang berbeda akan bergerak pada laju yang berbeda pula.
Dalam kromatografi kertas, fase diam adalah kertas serap yang sangat seragam. Fase gerak adalah pelarut atau campuran pelarut yang sesuai.
Berbagai jenis pemisahan yang sederhana dengan Kromatografi kertas telah dilakukan dimana proses dikenal sebagai "analisa Kapiler". Metoda-metoda ini sangat sesuai dengan kromatografi serapan, dan sekarang kromatografi kertas dipandang sebagai perkembangan dari sistem partisi. Salah satu zat padat dapat digunakan untuk menyokong fasa tetap yaitu bubuk selulosa.
Pada kromatografi Kertas peralatan yang dipakai tidak perlu alat-alat yang teliti atau mahal. Hasil-hasil yang baik dapat diperoleh dengan peralatan dan materi-materi yang sangat sederhana. Senyawa-senyawa yang terpisahkan dapat dideteksi pada kertas dan dapat segera diidentifikasikan. Bahkan jika dikehendaki, komponen-komponen yang terpisahkan dapat diambil dari kertas dengan jalan memotong-motongnya, kemudian dilarutkan secara terpisah.
b. Kromatografi Lapis Tipis (thin Layer Chromatography)
Teknik TLC/KLT fasa diam (terutama silika, alumina, dan selulosa) dilapiskan di permukaan sbuah plat pendukung (umumnya dibuat dari bahan kaca atau lembaran logam Al). Bila noda telah kering plat diletakkan secara vertikal dalam bejana yang sesuai dengan tepi yang di bawah dicelupkan dalam fasa bergerak yang terpilih, maka pemisahan kromatografi penaikan akan diperoleh. Pada akhir perkembangan, pelarut dibiarkan menguap dari plat dan noda-noda yang terpisah dilokalisir dan diidentifikasi dengan cara-cara fisika dan kimia seperti yang digunakan dalam kromatografi kertas.
Bila dibandingkan dengan kromatografi kertas, metoda Iapisan tipis mempunyai keuntungan, yaitu membutuhkan waktu yang lebih cepat dan diperoleh pemisahan yang lebih baik. Waktu rata-rata untuk kromatografi lapisan tipis dengan panjang 10 cm pada silika gel adalah sekitar 20 - 30 menit (tergantung dari sifat fasa bergerak), sedangkan pemisahan yang sama dengan memerlukan waktu dua jam. Untuk pemisahan-pemisahan secara kualitatif pada plat yang kecil memerlukan waktu sekitar 5 menit.
Hasil pemisahan yang baik ternyata bahwa penyerap dalam kromatografi lapisan tipis mempunyai kapasitas yang lebih besar bila dibandingkan dengan kertas. Keuntungan dari sistem serapan ialah dapat digunakan untuk memisahkan senyawa-senyawa yang sifatnya hidrofobi, seperti lipida-lipida dan hidrokarbon, di mana hal ini sukar dikerjakan dengan kertas. Sekarang pemisahan dengan lapisan tipis banyak digunakan dalam kimia organik dan beberapa dalam kimia anorganik. Lokasi dari senyawa-senyawa yang terpisah pada lapisan tipis dikerjakan seperti pada kertas, tetapi pereaksi-pereaksi yang lebih reaktif seperti asam sulfat dapat digunakan pada lapisan tipis, dengan catatan bahwa materi lapisan tipis adalah senyawa yang tak bereaksi seperti silika gel atau alumina.
E. ALAT DAN BAHAN
Alat :
1. Kromatografi Kertas
• kertas saring (fasa diam)
• bejana
• penggaris
• beaker glass
• penangas air
• spatula
• corong
• batang pengaduk
• mortar
2. Kromatografi Lapis Tipis
• kaca preparat kecil
• kaca preparat besar (20x20 cm)
• beaker glass
• neraca
• spatula
• kaca arloji
• gelas ukur
• pipet tetes
• penyuntik sampel
• penangas air
• corong
• batang pengaduk
• mortar
Bahan :
1. Kromatografi Kertas
• n-Hexane (fasa gerak)
• Kloroform
• daun menir
2. Kromatografi Lapis Tipis
• n-Hexane (fasa gerak)
• Kloroform
• silica gel (bahan penyerap)
• bunga bouganvile
F. PROSEDUR
a. Pembuatan lapisan tipis kecil
1. 2 gelas mikroskop yang dilekatkan satu sama lain dicelupkan dalam bubur silica gel (bubur silica gel dibuat dengan mencampurkannya dengan kloroform yang diaduk sampai homogen).
2. Setelah dicelupkan diangkat kembali, biarkan hingga kering di udara. Setelah kering bagian sisi yang terletak di sebelah dalam dari masing-masing gelas dibersihkan dengan kertas kering.
b. Pembuatan lapisan tipis besar
1. Timbang silika gel sebanyak 12 gram, tambah air sebanyak 27 ml diaduk sampai homogen, air yang digunakan adalah aquadest.
2. Tuangkan pada gelas mikroskop besar, 20x20 cm dan usahakan mendapatkan tebal permukaan yang serata mungkin dengan mengetep-ngetepnya diatas gabus.
3. Plat gelas yang telah dilapisi silika gel dikeringkan untuk diaktifkan dengan jalan memanaskan dalam oven dengan suhu 100°C selam 30 menit, makin lama makin baik.
c. Pembuatan cuplikan
Dipakai zat dari tumbuhan, misalnya kunir, daun atau bunga-bungaan, dapat juga zat organik yang tak berwarna.
1. Kunir, daun atau bunga dipotong-potong dan dilumatkan sampai halus dengan lumping porselen dan diekstrak dengan pelarut organik, contoh : kloroform atau pelarut lain.
2. Ekstrak disaring ambil bagian yang terlarut dalam kloroform kemudian diuapkan sehingga diperoleh larutan yang pekat.
d. Pembuatan kromatogram
1. Diatas lapisan tipis, teteskan zat yang akan dikromatografikan dengan pipa kapiler pada jarak kira-kira 1 cm dari bagian bawah kaca. Untuk plat yang kecil noda berupa titik, sedangkan untuk plat besar 20x20 cm berupa deretan titik-titik sehingga membentuk garis, biarkan beberapa saat hingga kering.
2. Lapisan tipis yang mengandung cuplikan dimasukkan dalam satu bejana yang berisi fasa gerak, untuk lapisan tipis yang kecil dapat ditempatkan dalam gelas piala bagian yang mengandung cuplikan dicelupkan dalam fasa gerak, noda jangan sampai tercelup dalam fasa gerak.
3. Setelah fasa gerak naik sampai hampir ujung atas lapisan, lapisan tipis diambil dari bejana atau gelas piala. Untuk plat kecil batas fasa bergerak dan noda-noda diberi tanda biarakan kering di udara.
4. Untuk mengetahui lokasi noda (bila tidak terlihat) maka setelah lapisan tipis kecil kering dimasukkan dalam gelas piala yang di dalamnya diberi Kristal iod.
5. Tentukan harga Rf untuk lapisan tipis kecil.
6. Penanganan plat besar selanjutnya bila dikehendaki untuk mendapatkan hasil pemisahan maka pita-pita yang merupakan komponen-komponen senyawa masing-masing dikeruk dan dikumpulkan secara terpisah, tiap-tiap bagian dicuci dengan kloroform yang kemudian perlu di uji lebih lanjut dengan menggunakan lapisan tipis untuk mengetahui apakah masing-masing bagian marupakan komponen tunggal atau masih merupakan campuran.
G. DATA HASIL PENGAMATAN
1. Kromatografi Kertas
Jarak yang ditempuh pelarut (cm) Jarak yang ditempuh senyawa (cm)
Hijau (Klorofil) Kuning Orange
15 7,5 11,5 15,1
Nilai Rf = Jarak yang ditempuh senyawa : jarak yang ditempuh pelarut
• hijau (klorofil)
Rf = 7,5 : 15
= 0,5 cm
• Kuning
Rf = 11,5 : 15
= 0,76 cm
• Orange
Rf = 15,1 : 15
= 1,0067 cm
2. Kromatografi Lapis Tipis
Jarak yang ditempuh pelarut (cm) Jarak yang ditempuh senyawa (cm)
6,5 2,4
Nilai Rf = jarak yang ditempuh senyawa : jarak yang ditempuh pelarut
= 2,4 : 6,5
= 0,3692 cm
H. PEMBAHASAN
a. Kromatografi Lapis Tipis (Thin Layer Chromatography)
Sampel yang dipergunakan dalam analisa KLT adalah bunga bouganvile, bunganya berwarna merah muda. bunga ini diekstrak dengan menggunakan kloroform terlebih dahulu sebelum dipergunakan untuk analisa.
Penanganan sampel yang pertama adalah memisahkan bunga yang akan dieksrak dengan daun dan ranting dari tanaman asalnya, saat praktikum jumlah dari bunga yang akan diekstrak adalah secukupnya (sekitar segenggam tangan), setelah dibersihkan bunga dipotong-potong dan kemudian dihaluskan secara manual dengan menggunakan mortar. Setelah cukup halus, kemudian tambahkan kloroform untuk mengekstrak zat-zat warna yang larut dengan pelarut organik yang terkandung dalam sample.
Jumlah kloroform yang ditambahkan secukupnya atau sampai sampel terbenam dengan pelarut, hal ini dimamaksudkan agar zat-zat warna yang terkandung dalam sampel dapat terekstrak dengan maksimal. hasil ekstraksi dari bunga bouganvile ini berwarna hijau muda transparan.
hasil ekstraksi kemudian dipanaskan untuk menguapkan pelarut organiknya, karena plearut organic menguap pada suhu dibawah 100oC sehingga proses pemanasan dilakukan diatas penangas air untuk memghindari kemungkinan terjadinya pemansan yang terlalu tinggi hingga hasil ekstraksi yang dipanaskan menjadi kering.
Dalam KLT, fasa diam yang dipergunakan adalah terutama silica gel, alumina dan selulosa. Menurut teori jika fasa diam yang dipergunakan adalah silica gel, maka pelarut yang dipergunakan adalah aquadest, akan tetapi saat praktikum, pelarut yang dipergunakan untuk melarutkan silica gel adalah pelarut organic yaitu kloroform. dibandingkan dengan aquadest kloroform merupakan pelarut yang mudah menguap sehingga plat yang sudah dilapisi dengan bubur silica gel, tidak perlu mengalami proses “pengaktifan” cukup dibiarkan di udara terbuka sampai kering.
Plat gelas yang dipergunakan pada saat praktikum berukuran kecil (gelas preparat/ mikroskop slide), sebelum dipergunakan plat tersebut terlebih dahulu dibersihkan dengan menggunakan tisu yang dibasahi dengan alcohol 70%. Setelah dibersihkan plat tersebut kemudian dikeringkan.
Proses pelapisan plat dengan bubur silica gel dilakukan diatas plat gelas kaca berukuran besar (20 x 20 cm) Karena permukaannnya rata. plat kecil yang dilapisi dengan bubur silica gel diletakan berdampingan dan bagian pinggirnya saling menempel sehingga permukaannya saling berhadapan ke atas.
Dalam 1 kali proses pelapisan, plat yang dilapisi ada 2. bagian pinggir luar plat ditahan dengan menggunakan gelas preparat yang lain sebanyak 2 tumpuk,. Kemudian bubur silica gel ditungkan diatas permukaan plat dan bagian atasnya didorong dengan kaca preparat yang lain, karena terdapat penahan sebanyak 2 tumpuk maka hal ini akan membuat tinggi lapisan bubur silica gel menjadi rata saat didorong dengan kaca preparat, hal ini dilakukan untuk menghindari kemungkinan terjadinya permukaan plat yang dilapisi tidak rata dan bergelombang sehingga akan mempengaruhi pemisahan padat saat pengambangan gerakan fasa gerak tidak sempurna atau alirannya terganggu. proses ini harus dilakukan secepat mungkin, karena silica gel yang dilarutkan dengan kloroform cepat sekali mengering.
setelah plat sudah dilapisi selanjutnya dibiarkan kering, proses pengeringannya cukup cepat karena pelarut yang dipergunakan untuk menglarutkan silica gel adalah kloroform, jika menggunakan pelarut aquadest, silica gel diatas plat membutuhkan waktu yang lebih lama untuk kering sehingga harus dikeringkan didalam oven terlebih dahulu untuk mempercepat proses pengeringannya.
silica gel yang sudah kering diatas plat tersebut kemudian ditetesi dengan sampel, proses penetesan sampel ini sulit sekali dilakukan, selain jumlah sampel yang harus diteteskan sedikit sekali, juga karena silica gel kering diatas plat tersebut tidak dapat menyerap sampel. setelah sampel diteteskan dengan menggunakan alat suntik, selanjutnya plat dimasukan kedalam beaker glass yang berisi fasa gerak dan ditutup dengan platik wrap, fasa gerak yang dipergunakan saat praktikum adalah n-hexane.
plat dimasukan kedalam beaker glass dengan posisi berdiri, sehingga jumlah fasa gerak didalam beaker glass tidak boleh melebihi tinggi sampel yang diteteskan diatas plat. kemudian ditutup kembali, saat praktikum noda sampel yang berhasil diteteskan dengan baik diatas plat hanya 1, dan nodanya berwarna hijau yang diperkirakan klorofil.
dari hasil praktikum tersebut maka jarak yang ditempuh pelarut n-hexane dalam KLT adalah 6,5 cm, dan jarak yang ditempuh senyawa yang terbawa oleh pelarut adalah 2,4 cm. dari data tersebut maka harga Rf-nya adalah 0,3692 cm.
b. Kromatografi kertas
sampel yang dipergunakan berbeda dengan sampel pada KLT, pada kromatografi kertas sampel yang dipergunakan yaitu daun menir yang berwana dominan hijau dengan bintik merah dan kuning.
proses preparasi sampel pada kromatografi kertas sama dengan preparasi sampel pada KLT, yaitu sampel dihaluskan dengan menggunakan mortar, ditambahkan pelarut kloroform kemudian dipanaskan diatas penangas air sampai sampel mengental.
pada kromatografi kertas, fasa diam yang dipergunakan adalah kertas yang sangat beragam dan saat praktikum dipergunakan kertas saring yang dipotong persegi panjang, dengan fasa gerak pelarut organic n-hexane. tidak seperti pada KLT, pada kromatografi kertas prosesnya cukup cepat, selain proses penetesan sampel tidak terlalu rumit, kromatografi kertas juga tidak perlu menunggu fasa diam kering untuk meneteskan sampel.
sebelum noda sampel diteteskan, terlebih dahulu kertas saring diberi garis dengan menggunakan pensil untuk membuat jarak antara noda dengan pelarut dibawahnya, dan yang kedua adalah membuat tanda untuk meneteskan sampel yang berjarak ± 2 cm. pada saat praktikum penetesan sampel dilakukan menggunakan tusuk gigi, saat penetesan noda sampel, fasa diam berada dalam posisi mendatar dan noda dibiarkan mengering terlebih dahulu sebelum dimasukan kedalam bejana yang berisi fasa gerak. penetesan noda yang terlalu banyak harus dihindari, karena kelebihan setiap komponen akan menyebabkan tidak akan terca¬painya kesetimbangan partisi selama ia bergerak, hingga ia akan mengakibatkan terjadinya kedudukan atau lokasi yang kabur.
setelah noda sampel mengering, kertas dimasukan kedalam bejana sudah jenuh dengan fasa gerak yaitu n-hexane, kertas saring berisi noda yang sudah kering tersebut diposisikan tegak berdiri dan bagian bawahnya terbenam dalam fasa gerak.
metoda yang dipakai dalam kromatografi kertas ini adalah metoda penaikan, yaitu kertas dicelupkan hingga ujung di mana aliran mulai bergerak terletak sedikit di atas per¬mukaan dari pelarut dan pelarut naik melalui serat-serat dari kertas oleh gaya kapiler. kertas sebagai serat-serat selulosa dengan lapisan yang sangat tipis dari molekul-molekul air yang berikatan pada permukaan. Interaksi ini dengan air merupakan efek yang sangat penting selama pengerjaan kromatografi kertas.
noda-noda yang naik dari sampel daun menir ini terdiri dari 3 warna, yaitu hijau, kuning dan orange. jarak yang ditempuh dari masing-masing warna adalah hijau 7,5 cm; warna kuning 11,5 cm; dan warna orange 15,1. sedangkan jarak yang ditempuh pelarut adalah 15 cm. dari data tersebut maka harga Rf untuk masing-masing warna adalah, warna hijau 0,5 cm; warna kuning0,76 cm; dan warna orange 1,0067 cm.
harga Rf dari kromatografi kertas ini cukup tinggi, salah satu penyebabnya adalah penggunaan n-hexane sebagai fasa gerak, molekul-molekul polar akan memiliki atraksi yang tinggi untuk molekul-molekul air dan kurang untuk pelarut yang non polar. Molekul-molekul polar dalam campuran sampel memiliki sedikit atraksi antara molekul-molekul air dan molekul-molekul yang melekat pada selulosa, dan karena akan menghabiskan banyak waktunya untuk larut dalam pelarut yang bergerak. Molekul-molekul seperti ini akan bergerak sepanjang kertas diangkut oleh pelarut. hal inilah yang menyebabkan nilai Rf menjadi tinggi.
Langganan:
Postingan (Atom)